王翀 朱晓蕾 黄嵘 王晓云

(南京大学医学院附属鼓楼医院神经内科，江苏 南京 210008)

随着生活和饮食习惯的改变，我国高血压(high blood pressure，HBP)患者日益增多[1]。临床统计数据显示，HBP是多种心脑血管病的病理基础和危险因素，长期高血压可引起动脉硬化，如动脉血管增厚、血管腔狭窄、血管变硬或形成斑块等[2-3]。脑动脉硬化(cerebral arteriosclerosis，CAS)是动脉硬化的一种，可能会导致记忆减退、脑出血、脑梗死、偏瘫甚至神经退行性疾病等[4-5]。因此，有效预防或早期诊断CAS具有重要的临床意义。长链非编码RNA ANRIL (Long non-coding RNA ANRIL，lncRNA ANRIL)是长度为 3.8 kb的lncRNA家族成员[6-7]。研究显示，lncRNA ANRIL与冠心病、颅内动脉瘤、2型糖尿病及多种恶性肿瘤密切相关[8-9]。但目前lncRNA ANRIL是否与HBP患者发生CAS有关还不清楚。本研究通过对比分析血浆lncRNA ANRIL在HBP和HBP/CAS之间的差异，探讨其可能的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月～2019年12月在我院就诊的HBP患者218例，其中合并CAS者89例作为高血压合并脑动脉硬化组(HBP/CAS)，未合并CAS患者129例作为高血压组(HBP)。高血压诊断标准：两次血压检测均值均收缩压≥140mmHg或舒张压≥90mmHg的患者。脑动脉硬化诊断标准：经病史症状、相关血生化指标；脑部血管彩超；经颅多普勒超声；CTA、MRA或DSA检查等确诊。根据病史和检验结果排除糖尿病、冠心病、肝肾功能不全、周围血管性疾病、高脂血症、急慢性感染性疾、系统性免疫功能疾病及恶性肿瘤等。本研究通过了医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 血生化仪由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供；GenEluteTM血浆/血清RNA提取试剂盒由德国默克公司提供；lncRNA-ANRIL RT-qPCR检测试剂盒由大连Takara Bio公司提供。

1.3 方法

1.3.1 临床参数测量统计 统计所有患者临床资料，记录患者收缩压和舒张压、性别、年龄、身高、体重、腰围、臀围，计算腰臀比和体重指数。

1.3.2 生化指标检测 检测前一晚9点后禁水禁食，次日清晨抽取静脉血，血生化仪检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血糖(GLU)及同型半胱氨酸(Hcy)浓度。

1.3.3 RT-qPCR检测各组患者血浆lncRNA ANRIL水平 采用GenEluteTM血浆/血清RNA提取试剂盒提取RNA。用lncRNA ANRILRT-qPCR检测试剂盒制备检测样品。以ABI 7500荧光定量PCR仪器 (美国Applied Biosystems)进行检测。以U6作为内参，经95℃/30秒，90℃/5秒，65℃/30秒40个循环得到最终数据，以2(-ΔΔCT)法计算lncRNA ANRIL水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS 15.0软件行统计学分析，数据经K-S检验进行正态性和方差齐性检验，数据符合正态分布并以2表示，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，计数资料采用2检验。Pearson法分析各变量间的相关性，单因素和多因素Logistic回归分析发生HBP/CAS的危险因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBP和HBP/CAS组患者人体临床参数比较 HBP/CAS组和HBP组患者性别、BMI、腰臀比及血压均无差异(P>0.05)；而相较于HBP组，HBP/CAS组患者年龄明显偏高(P<0.01)，见表1。

表1 HBP组和HBP/CAS组患者人体临床参数比较Table 1 Comparison of human clinical parameters between HBP group and HBP/CAS group

2.2 HBP和HBP/CAS组患者各生化指标比较 生化指标检测结果显示，与HBP相比，HBP/CAS组TC、TG、LDL-C、GLU和Hcy显著生高，HDL-C明显降低(P<0.05)。

2.3 HBP和HBP/CAS组患者血浆lncRNA ANRIL水平比较 RT-qPCR检测HBP和HBP/CAS组患者血浆lncRNA ANRIL水平，结果显示，相较于HBP组HBP/CAS组患者血浆lncRNA ANRIL水平明显升高(P<0.01)，见表2、图1。

表2 HBP和HBP/CAS组患者各生化指标比较Table 2 Comparison of biochemical indexes of patients in HBP and HBP/CAS groups

图1 HBP和HBP/CAS组患者血浆lncRNA-ANRIL水平比较Figure 1 Comparison of plasma lncRNA-ANRIL levels between HBP and HBP/CAS groups注：①P<0.01

2.4 HBP/CAS的危险因素分析 以年龄、TC、TG、LDL-C、HDL-C、GLU、Hcy作为自变量，以HBP是否合并CAS为因变量，单因素logistic回归分析结果显示，年龄、TC、TG、LDL-C、HDL-C、Hcy及lncRNA ANRIL与HBP/CAS的发生有关(P<0.05)；而通过多因素logistic回归进行分析，结果显示年龄、TC、TG、Hcy及lncRNA ANRIL是引起HBP/CAS发生的独立危险因素(P<0.05)，见表3。

表3 HBP/CAS的危险因素分析Table 3 Analysis of risk factors of HBP/CAS

2.5 HBP/CAS患者血浆lncRNA ANRIL水平与年龄、TC、TG、Hcy的相关性分析 采用Pearson法分析lncRNA ANRIL与年龄、TC、TG、Hcy的相关性，结果显示，lncRNA ANRIL与TC(r=0.7369，P<0.001)和TG(r=0.8013，P<0.001)呈强正相关，与年龄和Hcy不相关(P>0.05)，见图2。

图2 HBP/CAS患者血浆lncRNA ANRIL水平与年龄、TC、TG、Hcy的相关性Figure 2 The correlation of plasma lncRNA ANRIL levels with age,TC,TG,Hcy in HBP/CAS patients

3 讨论

LncRNA ANRIL是LncRNA大家族的一员，在恶性肿瘤和代谢性疾病中发挥一定作用。在癌细胞中，过表达LncRNA ANRIL可增加细胞增殖、存活、上皮间质转化和转移，而ANRIL功能的丧失会导致细胞产生相反的恶性生物学行为[8-11]。在代谢疾病中，LncRNA ANRIL与2型糖尿病、冠心病、脑梗塞等有关[12-14]。研究显示，LncRNA ANRIL可通过调节自噬途径中的microRNA-99a和microRNA-449a促进血管生成和血栓形成[15]。同时，LncRNA ANRIL与炎症存在联系，LncRNA ANRIL/miR-125a信号轴可作为潜在的生物标志物用于评估支气管哮喘的炎症水平和疾病严重程度[16]。Hu等[17]报道，LncRNA ANRIL通过miR-122-5p/BRCC3信号轴促进尿酸肾病中NLRP3炎症小体的激活。此外，研究还发现LncRNA ANRIL与平滑肌细胞衰老密切相关[18]。目前，还未有临床研究报道lncRNA ANRIL是否与HBP患者发生CAS有关。

本研究通过分析HBP和HBP/CAS组患者人体临床参数发现，两组患者在性别、BMI、腰臀比及血压上均无显著性差异，而HBP/CAS组患者的年龄明显偏高。血生化指标分析显示，HBP/CAS和HBP组患者血清TC、TG、LDL-C、GLU和Hcy水平存在明显差异。同时，LncRNA ANRIL在HBP/CAS组患者血浆中表达升高。为了分析上述差异指标与HBP/CAS发生的相关性，本研究通过logistic回归进行分析发现年龄、TC、TG、Hcy及lncRNA ANRIL是引起HBP发生CAS的独立危险因素。有研究证实，在老年HBP人群中Hcy是影响颈动脉硬化的危险因素[19-20]。还有研究显示，血清TC和TG是HBP患者颈动脉硬化及斑块形成的危险因素[21-22]。这些与本研究TC、TG和Hcy的分析结果相类似。LncRNA ANRIL与年龄、TC、TG和Hcy均为HBP发生CAS的独立危险因素。本研究进一步观察了LncRNA ANRIL与TC、TG和Hcy的相关性，结果发现lncRNA ANRIL与TC和TG呈强正相关。研究报道，巴基斯坦北部人群的LncRNA ANRIL单核苷酸多态性与家族性高胆固醇血症密切相关[23]。提示HBP患者血浆LncRNA ANRIL水平增加可能导致或标志血清TC和TG水平升高，最终增加CAS发生的风险。

4 结论与启示

血浆lncRNA ANRIL水平升高是HBP患者发生CAS的独立危险因素，而lncRNA ANRIL水平与TC和TG相关。lncRNA最初被认为是转录过程的副产物，不具有生物学功能。但近年来，越来越多的lncRNA被发现与多种疾病发生发展相关，甚至可以作为早期诊断标志物。因此，深入了解lncRNA家族成员的生物学功能具有重要意义。本研究发现血液中lncRNA ANRIL水平与TC和TG相关，但其具体关联机制还不清楚，有待于进一步实验探讨。