谷芳，王淑珍

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其病死率居妇科恶性肿瘤的首位[1]。卵巢癌化疗过程中产生的耐药是卵巢癌复发和治疗失败的最主要原因之一，卵巢癌细胞易对化疗药物如顺铂、紫杉醇等产生耐药性，从而导致治疗失败[2]。肿瘤化疗产生耐药的过程可能是多因素联合完成的，包括细胞环境中药物的解毒作用增加、化疗药物在细胞内积聚减少、排出增加、对DNA损伤耐受或修复增加和对促凋亡信号的抵抗[3]。

1967年Wolf第一次提出微囊泡(microvesicles，MV)的释放和它的生理功能[4]。MV是细胞以出芽方式产生的直径0.1～1 μm的具有双层膜结构的微囊泡[5]，以膜表面显著暴露磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)为特征[6-7]。

本研究通过人卵巢癌耐顺铂细胞SKOV3/DDP和敏感细胞SKOV3，通过超高速离心、流式细胞仪分离检测耐药细胞SKOV3/DDP释放的MV，进一步证实人卵巢癌细胞的耐药性可以通过一种“非遗传”的方式——MV的介导，以期为临床逆转卵巢癌耐药提供一种新的治疗靶点。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

人卵巢癌SKOV3、SKOV3/DDP细胞购自中国医学科学院肿瘤研究所，采用10%胎牛血清、2 mmol/L谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的RPMI1640培养液，培养于37℃、饱和湿度、5% CO2(V/V)、21% O2(V/V)条件下。顺铂购自美国Sigma公司，用DMSO溶液溶解成10 mmol/L的储存液，避光保存于4℃。Megamix Beads购自法国Biocytex 公司。Rhodamine123购自美国Sigma公司。流式细胞仪Gallious购自美国Beckman Coulter公司。

1.2 方法

1.2.1 微囊泡的提取分离 SKOV3/DDP生长期细胞无血清状态下培养12 h，收集上清液3 000 rpm、15 min离心去除细胞碎片，将上清液无菌状态下27 300 rpm、1 h、4℃超高速分离得到SKOV3/DDP的MV，用PBS或超高速分离后的medium将MV沉淀重悬，可-80℃分装冻存。……