谢锦霞 ，刘晶晶

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，早期症状不明显，晚期出现阴道出血等症状[1]。近些年，宫颈细胞学筛查的普遍应用使宫颈癌的发病率和死亡率已有明显下降，但癌细胞生物学特性多种多样，导致宫颈癌易发生转移，并对治疗产生不同的反应。因此进一步了解宫颈癌的发展机制能为早期诊断和晚期预后提供新的分子理论基础。长链非编码RNA(long noncoding，lncRNA)是一类非编码RNA，含有200个核苷酸，翻译潜力有限[2-3]，研究发现lncRNAs参与细胞内外的多种活动，包括基因转录、mRNA剪接和肿瘤发生等[4-6]。HNF1A AS1是一种新鉴定的lncRNA，自鉴定以来，HNF1A AS1已被证明在人类肿瘤发生中起关键作用，如在口腔鳞癌和胶质瘤细胞中，HNF1A AS1表达上调，促进癌细胞的存活和转移，提示HNF1A AS1可能作为癌基因促进癌症发展[7-8]。然而，HNF1A AS1是否对宫颈癌细胞具有强大的促癌作用还没有深入的研究。本研究拟探究HNF1A AS1在宫颈癌发展过程中的作用及机制，为治疗宫颈癌患者提供新的理论基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料

人宫颈癌细胞C33A和人宫颈上皮永生化细胞株H8细胞来自上海生物细胞研究所；DMEM(Dulbecco's-modified Eagle's medium)培养基和胎牛血清来自美国Gibco公司；CCK-8试剂盒、点突变试剂盒和双荧光素酶活性检测试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司；PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)、LipofectamineTM2000购于美国Invitrogen公司；钙粘附蛋白E(epithelial-cadherin，E-cadherin)、钙粘附蛋白N(N-cadherin)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bcl-2-Associated X，Bax)和GAPDH多克隆抗体购于上海圣克鲁斯生物科技有限公司；模拟物对照(mimics NC)、miR-320d 模拟物(miR-320d mimics)、抑制剂对照(inhibitor NC)、miR-320d抑制剂(miR-320d inhibitor)、干扰对照(siRNA NC)、HNF1A-AS1干扰(HNF1A-AS1 siRNA)、SOX4干扰(SOX4 siRNA)质粒由广州锐博生物科技有限公司合成。……