韦登文，覃 年，廖艳英

心肌缺血再灌注损伤是引起心肌梗死、冠心病等心血管疾病的重要原因之一，因而减轻心肌缺血再灌注损伤成为研究重点[1-2]。部分研究显示，麻醉药物能够减轻心肌缺血再灌注损伤，但其作用机制尚未阐明[3-4]。瑞芬太尼属于芬太尼类μ型阿片受体激动剂，其可抑制炎症反应及心肌细胞凋亡，从而减缓糖尿病动脉粥样硬化的发展[5]。miR-574-3p在心血管疾病中表达异常，并可能参与心血管疾病的发生及发展过程[6]。但miR-574-3p是否可作为瑞芬太尼减轻心肌缺血再灌注损伤的作用靶点，目前研究报道尚少。因此，本研究用缺氧/复氧处理心肌细胞，并建立心肌缺血再灌注损伤模型，探讨了瑞芬太尼对缺氧/复氧诱导的心肌细胞活性及凋亡的影响及其对miR-574-3p的调控作用。

1 材料与方法

1.1实验材料与试剂 注射用盐酸瑞芬太尼(宜昌人福药业有限公司，国药准字：H20030197)；大鼠心肌细胞H9C2(上海通派生物科技有限公司)；DMEM(美国Gibco)；胎牛血清、Lipofectamine2000(美国Thermo Fisher)；Trizol(美国Invitrogen)；反转录试剂盒、SYBR Green试剂盒(北京天根有限公司)；anti-miR-con、anti-miR-574-3p、miR-con、miR-574-3p mimics(广州锐博生物技术有限公司)；MTT、凋亡检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)；兔抗鼠人CyclinD1、Cleaved-caspase-3与二抗(美国Santa Cruz公司)。

1.2方法

1.2.1实验分组：将H9C2细胞接种于24孔板(1×104个/孔)后，置于含有体积分数为95%氮与5%二氧化碳(CO2)培养箱内缺氧处理24 h；弃旧培养基后加入DMEM新鲜培养基，将其置于37℃、体积分数5%CO2培养箱复氧处理6 h[7]，建立心肌细胞缺氧/复氧模型并记为模型组。……