吴 怡，徐 蕊，王云健，徐 燕，徐凤萧，陈秀珍，李 雅，李树民

(1．昆明医科大学科技成果孵化中心，云南 昆明 650000；2．昆明医科大学第二附属医院胃肠外科，云南 昆明 650500)

氨基酸是构成蛋白质大分子的基础物质。氨基酸分析在生物化学、临床医学、化工等领域有重要作用。目前高效液相色谱法为分析氨基酸的重要方法[1]；但是许多氨基酸无紫外吸收，需要经过衍生化之后才可以测定。常用的衍生化试剂有：水合茚三酮、邻苯二甲醛、异硫氰酸苯酯（PITC）、2,4-二硝基氟苯（DNFB）等。氨基酸分析仪多采用水合茚三酮衍生，但仪器价格较高，需双波长检测且有灵敏度不高等缺点；邻苯二甲醛、异硫氰酸苯酯具有挥发性，毒性大，会缩短分析柱的使用时间等缺点；2,4-二硝基氟苯作为衍生试剂，与氨基酸反应生成的衍生产物具有较强的紫外吸收，因此检测时灵敏度较高，分析结果准确、重复性好、操作简便、成本低等优点[2-3]，但过量DNFB对HPLC法测定氨基酸含量的分析结果有一定影响[1]，会产生对测定结果有干扰的副产物。

本实验选择DNFB为衍生化试剂，对7种不同性质的氨基酸，其中酸性氨基酸、中性氨基酸各两种，碱性氨基酸三种，分别为：Asp（pI=2.77）、Gly（pI=5.97）、GABA（pI=7.19）、Glu（pI=3.22）、His（pI=7.59）、Ccp（pI=7.32）、Arg（pI=10.76）进行衍生化；进而分组筛选最适流动相条件；用紫外分光光度计考察氨基酸的适宜检测波长；考察流动相中加入N,N-二甲基甲酰胺（DMF）以及柱温变化对氨基酸样品峰产生的影响；采用正交设计考察氨基酸衍生化条件（包括衍生化试剂的加入量、衍生化温度、衍生化时间）；……