李 莉夏 晶彭韦楠曹 帅李丽敏季 申*

（1.中国医药工业研究总院，上海 201203；2.上海市食品药品检验所，国家药品监督管理局中药质量控制重点实验室，上海 201203）

拔毒生肌散来源于清代名医赵廷海秘制伤药方，由红粉、黄丹、轻粉、煅石膏等8 味药材组成，临床上用于治疗久溃不愈的疮、疡、痈，能有效改善伤口愈合情况，减少伤口愈后瘢痕挛缩，尤其在糖尿病足上具有良好的效果［1-4]。依据本草考证结果，拔毒生肌散中君药红粉是水银、硝石、白矾或水银和硝酸炼制而成的红氧化汞（HgO），具有拔毒排脓、去腐生肌的功效，但有大毒；臣药轻粉是升华法炼制而成的氯化亚汞（Hg2Cl2），可攻毒敛疮，加强君药去腐的功效，但也有毒［5-10]，两者为方中必不可少的功效物质，但其所含有的大量汞可通过皮肤吸收反复用于局部创面，会引起慢性蓄积，对多种器官产生损伤，使用不当可能导致汞急性中毒［11-15]。因此，需对制剂中红粉、轻粉进行科学有效的质量控制。

拔毒生肌散现行质量标准［16]以碘量滴定法测定轻粉含量，电位滴定法测定红粉含量，但前者数据不稳定、重复性较差，后者数据偏高，导致现行方法无法有效控制制剂中含汞矿物药的质量，产生临床应用安全风险。本研究旨在建立专属性更强、准确度更高的含量测定方法，用于拔毒生肌散中红粉、轻粉的质量控制，以期保证患者用药安全。

1 材料

1.1 仪器 S and M series 型原子吸收分光光度仪（美国Thermo 公司）；Milli-Q 超纯水机（美国Millipore 公司）；电子天平（德国Sartorius 公司）；MARS 5 型微波消解仪（美国CEM 公司）；水浴锅（美国Polyscience 公司）；涡旋仪（美国Scientific Industries 公司）。

1.2 试剂与药物 拔毒生肌散［健民集团叶开泰国药（随州）有限公司]。汞标准溶液（HC957309，1 000 mg/L，德国Merck 公司）。硝酸、盐酸均为分析纯（德国Merck 公司）；水为去离子水（经Milli-Q 超纯水机处理）。

2 方法与结果

2.1 仪器工作条件 针对拔毒生肌散中汞含量高的问题，本实验采用火焰原子吸收分光光度仪进行检测，具体见表1。

表1 仪器工作条件

2.2 对照品溶液制备 精密量取汞标准溶液适量，5%硝酸分别制成每1 mL 含1、2、5、10、20、50 μg 该元素的溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备

2.3.1 溶液1（红粉提取）精密称取散剂0.1 g，置于250 mL具盖塑料瓶中，加入200 mL 水后密塞，涡旋2 min，40 ℃水浴加热7 h，取出，冷却至室温，摇匀后取50 mL于离心管中，3 900 r/min 离心5 min，取10 mL 上清液至20 mL 量瓶中，加10%硝酸稀释至刻度，即得（离心后应立即取出上清液）。

2.3.2 溶液2（总汞提取）精密称取散剂0.1 g，置于聚四氟乙烯消解罐中，加入5 mL 硝酸-盐酸混合溶液（4∶1）后进行消解，程序见表2，完成后将溶液转移至50 mL塑料量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，离心，取1 mL 上清液于10 mL 量瓶中，5%硝酸定容至刻度，即得。同法制备空白溶液。

表2 微波消解程序

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 取对照品溶液适量，在“2.1”项条件下测定。以吸光度为纵坐标（A），溶液质量浓度为横坐标（X）进行回归，得方程为A=0.001 90X-0.000 7（r=0.999 7），在1～50 μg/mL 范围内线性关系良好。按“2.3”项下方法制备21 份空白溶液，火焰原子吸收分光光度法测定吸光度，以S/N=3 时的质量浓度为检测限，测得其数值为0.62 mg/L。

2.4.2 专属性试验 按“2.3”项下方法制备缺红粉、轻粉+红粉的阴性样品，发现前者中汞含量接近检测限，而后者中低于检测限，表明制剂中红粉含量测定受轻粉等其他药味的干扰较小，总汞含量测定几乎不受影响。

2.4.3 稳定性试验 按“2.3”项下方法制备供试品溶液1、2，于0、20、24 h 在“2.1”项条件下测定，测得红粉中汞含量RSD 为2.3%，总汞含量RSD 为2.9%，表明溶液在24 h 内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验 精密称取散剂0.09、0.10、0.11 g，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液1，在“2.1”项条件下测定，测得红粉中汞含量RSD（n=9）为2.8%；另精密称取0.09、0.10、0.11 g，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液2，在“2.1”项条件下测定，测得轻粉中汞含量RSD（n=9）为4.4%，表明该方法重复性良好。

2.4.5 加样回收率试验 精密称取红粉中汞含量已知的散剂0.05 g，分为低、中、高3 组，每组加入汞含量已知的红粉适量，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液1，在“2.1”项条件下测定，计算回收率，结果见表3；另精密称取总汞含量己知的散剂0.05 g，分为低、中、高3 组，每组加入汞含量已知的轻粉适量，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液2，在“2.1”项条件下测定，计算回收率，结果见表4。

表3 红粉中汞加样回收率试验结果（n=9）

表4 轻粉中汞加样回收率试验结果（n=9）

2.5 样品含量测定 采用上述方法对9 批样品进行测定，结果见表5。

表5 红粉、轻粉含量测定结果（以汞计，n=2）

3 讨论

3.1 关键性技术 拔毒生肌散中红粉、轻粉均为含汞矿物药，如何实现两者分离是本研究的难点。调研文献［17-18] 结合前期研究发现，红粉在低浓度酸溶液中的溶解性良好，而轻粉不溶于低浓度酸溶液，由此本实验创建了一种间接测定法用于制剂轻粉所含汞含量的测定：先准确测得拔毒生肌散红粉中汞含量，再准确测定拔毒生肌散中总汞量，后者减去前者，即得。

3.2 红粉、轻粉的差异化提取 在寻找制剂中红粉的专属提取溶剂时，本实验先选择10% 硝酸（轻粉原料不溶），发现提取液中汞含量远高于拔毒生肌散中的理论量，其原因可能为方中轻粉所含的汞亦有溶出，而且轻粉原料与制剂中轻粉存在溶解性差异，严重干扰了红粉的专属提取。进一步考察水（红粉在20 ℃水中的溶解度为0.005%［18]）及0.1%、0.5%、1%硝酸或盐酸对制剂中红粉所含汞提取率的影响，发现除水外其余溶剂的提取率均大于100%，表明以水为提取溶剂较为可行。再对以水为溶剂的提取方式、提取温度、提取时间等影响制剂中红粉所含汞提取的因素进行考察，最终确定该药材提取方法为40 ℃水浴中温浸7 h，既能实现制剂中其专属提取，又能保证其所含的汞基本不溶出。

4 结论

红粉、轻粉的功效和毒性均不同，故测定两者含量对拔毒生肌散的质量控制具有重要意义。本实验建立了拔毒生肌散中红粉、轻粉的差异化提取方法，采用微波消解法提取总汞，可保证两者含量的准确测定；火焰原子吸收分光光度法专属性比滴定法更好，准确度也更高，以其测定汞含量可解决现行标准中相关方法准确度低、缺乏专属性的问题，能科学有效地监控方中两者质量，保障其临床安全应用。