张安洁,张 慧,殷文婷,肖望成,王 玥,魏 荣,代飞燕*,李晓成*

(1.云南农业大学动物医学院，云南昆明 650201；2.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；3.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

猫冠状病毒(Feline coronavirus，FCoV)为有囊膜单股正链RNA病毒[1]，根据致病性，FCoV分为猫传染性胃肠炎病毒(Feline enteric coronavirus，FECV)和猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus，FIPV)两种生物型[2]。FECV多为慢性感染，主要引起猫轻微的腹泻，治疗后即可康复[3]；FIPV可引致猫传染性腹膜炎(FIP)，病理变化为猫腹腔内出现纤维性浆膜积液和各组织肉芽肿性炎症，少数猫会出现神经症状[4-6]，多为急性感染。FIP病程短，致死率高，危害严重，在世界范围内存在[7-9]。

目前，国外已研发多种FCoV PCR检测方法，如套式PCR、荧光RT-PCR等，但这些方法检测周期长，操作复杂，仪器昂贵。重组酶介导等温核酸扩增(recombinant enzyme mediated isothermal nucleic acid amplification，RAA)是一种新型的核酸快速检测方法，能在37 ℃～42 ℃下进行等温扩增，10 min～20 min内检测到目标核酸且灵敏度较高[10-11]，该方法已被应用于细菌、病毒、寄生虫等多个领域的检测[12]。本研究建立了FCoV荧光RT-RAA检测方法，并对方法的特异性、敏感性等进行了验证，在国内外尚属首次。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒，天根生化科技有限公司产品；荧光RAA法检测试剂盒、荧光RT-RAA法检测试剂盒仪，奇天基因生物技术有限公司产品。

1.1.2 主要仪器 恒温振荡混匀仪(RAA-B6100)、核酸扩增荧光检测仪(RAA-F1620)，奇天基因生物技术有限公司产品。

1.1.3 临床样品 疑似FCoV感染临床样品猫腹水、全血及粪便共计30份。通过生化、血常规、试纸条检测确诊为猫疱疹病毒(Feline herpesvirus，FHV)、猫杯……