黄宝学，黄小玲

(1. 广西田东县动物疫病预防控制中心，广西 田东 531500； 2. 广西田东县印茶镇水产畜牧兽医站，广西 田东 531500)

2020年6月，田东县某鸡场的2 200只20日龄雏鸡出现呼吸困难、腹泻、排白色粪便、精神萎靡不振、少食或不食、缩颈、羽毛松乱、挤堆、跛行等症状。5 d共发病360羽，死亡91羽，发病率16.36%，病死率25.28%。鸡场使用阿莫西林、氟苯尼考、硫酸粘菌素拌料、饮水治疗4 d无效，前来求诊。笔者通过对病死鸡进行剖检，采集病料进行细菌分离培养鉴定，确诊为大肠杆菌病，现将诊治情况报道如下，供临床参考。

1 材料与方法

1.1 检测病料剖检4只病死鸡，观察病理变化，并无菌采集肝脏、脾脏作为检测病料。

1.2 主要试剂麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基、营养琼脂培养基、普通肉汤培养基、微量生化鉴定管、药敏纸片(泰妙菌素、硫酸粘菌素、丁胺卡那、安普霉素、阿莫西林、磺胺间甲氧嘧啶、诺氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、大观霉素)，均购自杭州微生物试剂有限公司。

1.3 致病性试验动物7日龄健康雏鸡30只，购自广西富凤农牧集团。

1.4 细菌分离培养无菌取病死鸡的肝脏、脾脏划线接种于麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝培养基，37 ℃培养24 h，观察菌落形态特征并划线传代培养纯化3 代后钓取纯化的单菌落进行革兰氏染色，显微镜观察细菌形态。单个典型菌落继续接种普通肉汤增殖培养。

1.5 生化试验通过糖发酵试验(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇)、尿素酶试验、V-P试验、M.R试验、明胶液化试验、吲哚试验检测分离菌的生化特性。

1.6 致病性试验取健康雏鸡20只，随机分成2组，每组10 只。试验组用分离纯化细菌的肉汤培养物(大肠杆菌浓度为3×109CFU/mL)皮下注射，每只0.2 mL；对照组皮下注射生理盐水，每只 0.2 mL。各组鸡隔离饲养，观察发病死亡情况。对死亡雏鸡剖检，无菌取脾脏、肝脏组织，用相同方法进行细菌分离培养鉴定。

1.7 药敏试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法，用10种药物进行药物敏感性试验：将纯化细菌接种于普通营养琼脂培养基，然后将各药敏纸片贴于培养基表面，37 ℃培养16～24 h，测量抑菌圈直径，记录菌株的敏感程度：抑菌圈直径小于10 mm为低度敏感，11～15 mm之间为中度敏感，大于15 mm为高度敏感。

2 结果

2.1 病理变化病死鸡剖检可见肝周炎、心包炎，心外膜水肿，心包囊混浊，囊内充满淡黄色的纤维素性渗出物，为典型的大肠杆菌病病变特征。

2.2 细菌分离培养及染色镜检在麦康凯琼脂培养基上形成光滑湿润、边缘整齐、稍隆起的红色菌落；在伊红美蓝琼脂培养基上形成圆形、稍隆起、表面光滑、紫黑色带金属光泽的菌落，直径2.0 mm左右。钓取菌落革兰氏染色，显微镜下观察呈粉红色、短小杆状、两端钝圆、散在或成对的革兰氏阴性杆菌(见图1)。

图1 分离菌形态特征(1 000×)

2.3 生化试验结果分离菌能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇，且产酸产气；蔗糖发酵试验产酸不产气；不液化明胶；吲哚试验和M.R试验均为阳性；尿素酶试验阴性；V-P试验阴性(见表1)。结合革兰氏染色镜检与生化特性，确定分离菌为大肠杆菌。

表1 分离菌生化特征

2.4 致病性试验结果对照组全部鸡无发病死亡，正常存活。试验组鸡接种菌液后12 h开始发病，临床表现为精神萎靡、腹泻、少食或废食，24～48 h陆续死亡，发病率、死亡率均达100%。剖检病死鸡可见心包炎、肝周炎、气囊炎。采集肝、脾组织涂片镜检，可回收到致病菌，生化试验结果与接种菌一致，表明分离菌为致病性大肠杆菌。确诊本次发病为大肠杆菌病。

2.5 药敏试验结果分离的大肠杆菌对安普霉素、丁胺卡那、恩诺沙星高度敏感，对其他药物敏感性较差(见表2)。

表2 分离菌药敏试验结果

3 防治措施

根据诊断及药敏试验结果，采取以下防治方案：(1)用10%安普霉素2 g/kg拌料，10%恩诺沙星1 g/kg 兑水，隔天交叉轮换用药，连用6 d。(2)对病情严重鸡及病死鸡作深埋无害化处理。(3)加强饲养管理及做好卫生清洁消毒，注意通风换气，减少鸡群应激反应。用药第7 d后再无鸡发病死亡，疫情得到有效控制。

4 讨论

4.1鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌(Escherichiacoli)引起的细菌性传染病，对养鸡业危害较大[1]。不同品种及日龄的鸡一年四季均可感染，以2～3 周龄雏鸡多发，发病率和死亡率较高[2]。本病可通过水平传播和垂直传播，可单纯感染但更多的是继发和混合感染[3，4]。大肠杆菌病是环境性和条件性疾病，环境卫生条件差、各种应激、饲养管理不当等可诱发本病发生。在生产上鸡场一方面要防止外源性致病菌的侵入，严格检疫购入雏鸡；另一方面要加强饲养管理和环境卫生消毒，推行全进全出制饲养模式，保持合理的饲养密度。在冬春寒冷和气温多变季节要做好鸡舍的通风防寒保暖，防止恶劣环境给鸡造成的不良应激。提供全价营养饲料，保证鸡充足的营养供给，提高鸡群抵抗力。及时清除舍内粪污，加大消毒力度，减少大肠杆菌及其他病原生长繁殖。

4.2鸡大肠杆菌病的临床症状表现多样，因菌株侵入的数量和毒力、感染途径、应激因素、鸡的不同生长期等有很大差别，常见有败血症、肠炎、眼炎、关节炎、气囊炎、脐炎等症状[5]。临床上与鸡沙门氏菌病、滑液囊支原体病、传染性法氏囊病等症状相似，加上近年来混合感染病例增多，只有通过实验室检验确定感染病原才能作出准确诊断，采取针对性的防控措施控制疫情蔓延。

4.3本次采用10种抗菌药物对分离的大肠杆菌进行药敏试验，结果只对3种药物高度敏感，表明该菌已产生了广泛的耐药性。因此，鸡场在平时的饲养中不要盲目、超量、滥用和添加抗生素药物，发生大肠杆菌病(或其他疫病)时最好进行药敏试验，选择敏感药物治疗，疗程、剂量要足够，用法要恰当，并将几种药物交替穿梭使用[7]。