唐婉林，王路得，顾美萍，Kamara SAIDU，汪琪，李明洋，陈韶，张丽芳

温州医科大学微生物学与免疫学教研室,浙江温州325035

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤之一,在全球女性恶性肿瘤中发病率仅次于乳腺癌居第二位［1］。人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)高危型别16、18、31、33、45、58 等感染与宫颈癌的发生和发展密切相关。尽管HPV 高危型别感染呈区域或地区分布特点,但研究表明,全球诱发宫颈癌的主要型别为HPV16 和18,尤其以HPV16 多见,约占宫颈癌组织细胞中 HPV 检测的 85%［2］。HPV16 可通过表达E6 和E7 肿瘤蛋白诱发宫颈癌,目前对E6 和E7 蛋白的致癌机制研究表明,E6 和E7 蛋白可分别通过抑制宫颈细胞抑癌基因p53 和pRB 的表达,诱导宫颈细胞恶性转化并发展为宫颈癌。而HPV16 E5 蛋白主要在宫颈癌发生的早期阶段发挥诱导细胞恶性转化作用,即可通过增强表皮生长因子(epidermal augmentum factor,EGF)表达,干扰宿主免疫应答和增进病毒免疫逃逸,抗凋亡和促进血管生成,并与E6和E7 蛋白在增强细胞永生化潜能方面具有协同作用等,发挥着早期诱导细胞恶性转化的作用。因此,E5 蛋白是诱发早期宫颈恶性转化的蛋白之一,也是早期靶向治疗和分子诊断的靶抗原之一［3］。

本研究通过生物信息学方法分析HPV16 E5 蛋白的免疫优势肽段,进一步通过免疫白兔的方法制备高效价多克隆抗体并鉴定其免疫原性,通过间接细胞免疫荧光试验验证多克隆抗体识别和结合HPV16 E5 蛋白的特异性,为HPV16 E5 蛋白的生物学特性研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF 级日本大耳白兔,雌性,6 ～8周龄,体重4 ～5 kg,购自温州医科大学实验动物中心,合格证号:SYXK(浙)2014-0006。……