狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测法的建立及验证

2021-06-18刘宏伟田玉玲朱琨莹张岩杨帆刘银星石亮闫昆明

中国生物制品学杂志 2021年6期

刘宏伟，田玉玲，朱琨莹，张岩，杨帆，刘银星，石亮，闫昆明

1.长春百克生物科技股份公司,吉林长春130012；2.长春市儿童医院,吉林长春130000；3.吉林大学第一医院艾滋病与病毒研究所,吉林长春130021

狂犬病是由狂犬病病毒感染导致的以侵犯中枢神经系统为主的急性人兽共患传染病［1］,多见于犬、狼、猫等动物,人类多由于被患病动物咬伤而感染,一旦发病,死亡率几乎100%。目前,接种疫苗是有效预防狂犬病的主要手段之一,人用狂犬病疫苗是将狂犬病病毒经灭活后制备而成［2-3］。糖蛋白刺突是位于狂犬病毒表面的保护性抗原,也是唯一能诱导宿主产生中和抗体的蛋白［4-5］,因此病毒含量决定了保护性抗原的含量,与疫苗质量密切相关。

病毒滴度可反映疫苗中的病毒含量,是狂犬病疫苗生产过程中的关键质量控制参数。病毒滴度的传统检测方法为小鼠脑内滴定法,该方法对检测人员熟练程度要求较高,动物状态也会影响检测结果,导致结果不稳定,重复性差,且耗时较长(14 d)［6-7］。直接免疫荧光技术是利用荧光素标记的已知抗体,与细胞中狂犬病病毒特异性结合,经紫外光激发可产生荧光,以检测狂犬病病毒含量［8］,该方法避免了小鼠脑内滴定法的诸多缺点。因此,本研究采用MRC-5 细胞建立狂犬病病毒滴度的直接免疫荧光检测法,以期应用于疫苗生产过程中的质量控制。