周思彤，王永胜，田卫花，魏曼，李莎莎，窦娇莹

甘肃省中医院检验科,甘肃兰州730050

2020 年 1 月 12 日,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)正式将引起新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19)的病原体命名为“2019 新型冠状病毒”(2019 Novel CoronaVirus,2019-nCoV),国际病毒分类学委员会命名为重症急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)。2019-nCoV 传染性强,其核酸检测是目前诊断2019-nCoV 引起的COVID-19 的金标准。实时荧光定量PCR 技术具有较高的特异性和敏感性,是目前核酸定量检测较为理想的方法之一。室内质量控制(indoor quality control,IQC)是确定检测结果是否可靠、能否发出报告的一项重要措施［1］。而第三方商品质控品不易获得、价格昂贵。根据上述情况,本文结合实验室的实际工作,对自制2019-nCoV 核酸检测室内阳性质控品的可行性进行分析,并评估其临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器 阳性对照品来自复星长征2019-nCoV 核酸检测试剂盒(含2019-nCoV RNA 的假病毒),购自上海复星长征医学科学有限公司；圣湘病毒RNA 提取试剂盒及圣湘2019-nCoV 核酸检测试剂盒(多重荧光PCR 法)购自湖南圣湘生物科技有限公司；置有正常人鼻咽试子的病毒保存液购自西安天隆科技有限公司；实时荧光定量PCR 系统(ABI-stepOne 型)购自美国ABI 公司。

1.2 质控品的制备 将阳性对照品于室温放置,完全复融后,用混匀器充分混匀,置有正常人鼻咽试子的病毒保存液制成稀释液,将阳性对照原液倍比稀释(1︰1 ～ 1︰64),按照病毒 RNA 提取试剂盒说明书步骤提取病毒RNA 作为模板,按照2019-nCoV 核酸检测试剂盒说明书配制反应体系并预设反应程序,荧光实时定量PCR 法检测ORFlab 基因的Ct值,确定大致稀释比例。……