杨柳 ，林永润 ，牟豪 ，许国洋 ，余远迪 ，沈克飞 ，付利芝

1.重庆市畜牧科学院,重庆402460；2.重庆市兽用生物制品工程技术研究中心,重庆402460；3.西南大学荣昌校区,重庆402460

兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)感染引起的一种急性、接触性和高致死性传染病,以发病兔全身实质器官水肿、出血性变化和淤血为主要特征［1］。1989 年,世界动物卫生组织(Office International des Épizooties,OIE)将 RHD 列为B 类传染病,该病对经济学和生态学可产生重要影响［2］。

目前广泛使用的RHD 组织灭活疫苗是将含RHDV 的动物组织匀浆,经甲醛灭活后制备而成,在防控RHD 中发挥了重要作用,但该疫苗的制备过程不符合动物福利要求,且病毒量难以控制,不易保存,存在灭活不彻底向环境散毒的风险［3］,因此,研发新型疫苗显得尤为重要。RHDV 为单股正链RNA病毒,病毒粒子呈球形、无囊膜、20 面体对称,不易进行体外大量培养。RHDV 衣壳蛋白VP60 是主要结构蛋白,相对分子质量约60 000,180 个VP60 单体组成病毒粒子核衣壳。VP60 蛋白是病毒的免疫保护性抗原,在诱导宿主免疫反应中发挥重要作用,是RHD疫苗研究的靶标抗原［4］。有研究采用 E.coli［5］、酿酒酵母［6］、昆虫细胞［7］、猪痘病毒［8］及植物［9］等系统表达了VP60 蛋白,但由于其相对分子质量较大,原核或真核系统表达时均存在表达不稳定及表达量偏低的缺点,增加了亚单位疫苗生产成本。MARTINEZTORRECUADRADA 等［4］研究发现,位于 VP60 蛋白N-末端第 31 ～ 250 位(L 区)和 C-末端第 477 ～ 579位(H 区)的氨基酸是VP60 蛋白的抗原区域；孟春春等［10］将这两抗原区域和Th 细胞表位融合表达,并用融合蛋白免疫家兔,获得的抗体可抵抗致死剂量RHDV 攻击。……