陈宗香，张勇侠，高雅丽，康庄，罗心梅，丛聪，李立，刘兰军

成都生物制品研究所有限责任公司,四川成都610023

2019 年,菲律宾、中国香港、美国多州等多地暴发麻疹疫情；美国疾病控制与预防中心网站显示,未接种疫苗儿童的比例已翻倍,超10 万婴幼儿未接种任何疫苗［1］。由于麻疹具有极强的感染性,因此,接种麻疹疫苗是控制麻疹传播最有效的方法。

麻疹病毒(measlesvirus,MV)属副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus),基因组全长为15 894 个核苷酸［2］。世界上广泛使用麻疹减毒疫苗株的母本株是Edmonston 野毒株,如AIKC、Zagreb、Schwarz 及 Moraten 疫苗株［3］。Edmonston野毒株经传代适应,获得麻疹减毒株Edmonston A及B。这两种减毒株分别在鸡胚细胞上继续传代及低温传代适应获得更为减毒的Schwarz 及Moraten疫苗株。研究表明,麻腮风水痘四联疫苗中,英国GSK 公司麻疹疫苗株Schwarz(MVSW)及美国默沙东公司的麻疹疫苗株Moraten 序列的核苷酸和蛋白质序列完全一致［4］。目前,Schwarz ／ Moraten 疫苗株是世界范围内使用最广泛的麻疹疫苗株［5］。

本研究利用反向遗传系统,将MVSW株全长cDNA连接至载体pT7-MCS2,构建MV 全长质粒pT7MVSW,将其与3 个辅助质粒及表达T7RNA 聚合酶的质粒(pT7-T7RNAP 及pCDIBP-T7RNAP)共电转染Vero细胞,拯救获得rMVSW。旨在为进一步开发以rMVSW为载体的新疫苗的研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞、疫苗株及质粒 P141 代Vero 细胞、原代鸡胚细胞(chick embryo cells,CEC)、麻疹沪191 疫苗株(MVS191)、质粒 pT7-T7RNAP 及 pCDIBP-T7RNAP均由成都生物制品研究所有限责任公司制备和保存；载体pT7-IRES His-CDNA 购自日本TaKaRa 公司。

1.2 主要试剂 高纯度病毒RNA 提取试剂盒购自瑞士 Roche 公司；Phusion 高保真 DNA 聚合酶、T4 DNA连接酶及限制性内切酶购自美国NEB 公司；随机引物及SuperscriptⅢ反转录酶购自美国Invitrogen 公司；……