张玳宁，于秀华，张 舒，段 铭*

(1.吉林大学 动物医学学院 人兽共患病研究所 人兽共患病研究教育部重点实验室，吉林 长春 130062；2.吉林大学 第一医院，吉林 长春 130021)

环状RNA(circular RNA，circRNA)是近些年才发现的一种新的内源性非编码RNA，具有独特的闭合环状结构，由前体mRNA反向剪接产生[1]。大约40年前，这些环状转录本被认为是mRNA剪接的副产物[2]，但随着RNA测序技术的发展，现在已发现数以千计的circRNA。已有的研究结果表明，circRNA表达具有较高的组织特异性和发育阶段特异性，且在基因表达调控中具有重要的生理功能[3]，在癌症、心血管疾病、中枢神经系统疾病等生理病理进程中扮演了重要的角色。

甲型流感病毒(influenza A virus，IAV)，属于正黏病毒科，单股负链RNA病毒，对人类及动物的生命健康具有重大危害，但是宿主编码的circRNA在IAV与宿主细胞相互作用中的功能及其机制尚不清楚[4]。本实验室前期基于基因芯片技术分析circRNA在IAV感染A549细胞中的表达，发现hsa_circ_0070421的表达显著上调[5]。本研究探讨了hsa_circ_0070421在IAV感染过程中的表达及其功能，研究结果有助于认知circRNA在IAV与宿主相互作用中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂聚肌苷酸胞苷酸(Poly I：C)和大肠杆菌O55：B5的脂多糖(LPS)购自Sigma-Aldrich公司；Cisplatin购自MedChem Express公司；超纯琼脂糖凝胶(UltraPure Agarose)购自Invitrogen公司；抗IAV-M1抗体购自Abcam公司；抗β-actin抗体购自Cell Signaling公司。

1.2 细胞培养A549和THP-1细胞在含有10%胎牛血清(FBS)(HyClone)和100 U/mL青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI-1640(Corning)中培养；将MDCK、A172、Caco-2和SH-SY5Y细胞维持在含10% FBS的DMED(Corning)中培养，并置于37℃、4%CO2培养箱中生长。

1.3 病毒和病毒感染将流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)在11日龄鸡胚尿囊腔中增殖。用PBS洗涤细胞，并用感染复数(MOI)=3的病毒与含有1 mg/L TPCK处理的胰蛋白酶(Sigma-Aldrich)的培养基一起孵育1 h，吸附后，吸出上清液，将细胞培养指定的时间。……