郝 镯，张珊珊，李 楠，田 多，李吉平，孟轲音，万忠海，穆玉堂，李忠义，王承宇

(军事科学院 军事医学研究院 军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，吉林 长春 130122)

犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种高度传染性传染病，在犬及野生肉食动物中广泛传播，是危害犬及毛皮经济动物的主要疫病之一，给宠物业和毛皮动物产业带来严重的经济影响[1]。目前对CDV的检测方法主要有ELISA、半定量PCR、LAMP等[2]，这些方法灵敏度高，特异性好，但是反应时间长，对实验操作人员的技术水平和仪器精密度要求高，不适于兽医临床或野外现场检测。胶体金检测试纸条的方法虽然简便快速，但灵敏性较低，且容易出现假阳性，因此不适合患病动物的早期诊断。

重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification，RPA)是一种恒温核酸扩增技术，按照RPA反应要求设计上下游引物，根据不同的RPA产物检测方法设计不同的检测探针。RPA反应包含3种核心酶即重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换多聚异构酶，它们协调引物配对靶向RNA/DNA合成DNA，短时间内将核酸模板从痕量水平扩增到可检测水平，具有高敏感性和特异性[3]，非常适于兽医临床的早期诊断。SYBR Green Ⅰ是一种可结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green Ⅰ发出微弱的荧光，一旦与双链DNA结合聚集后，荧光大大增强。由于RPA引物标记FAM基团，因此扩增的靶标产物与SYBR Green Ⅰ结合后可产生荧光绿色沉淀复合物，非靶标产物与SYBR Green Ⅰ结合后只显现核酸染料的原始颜色，即为红褐色，RPA扩增产物与SYBR Green Ⅰ结合使结果可通过肉眼观察，所以适用于临床及野外检测[1]。……