蔡文臣,张诗汇,高一冰,牛婉丽,徐 洪,3,杨 方*

(1.华北理工大学公共卫生学院,河北唐山 063210; 2.华北理工大学临床医学院,河北唐山 063210;3.河北省器官纤维化重点实验室,河北唐山 063210)

矽肺纤维化主要是由于长期吸入游离二氧化硅(SiO2)粉尘引起的,以矽结节形成和弥漫性肺间质纤维化为主要病理变化的一种职业性肺病,发生机制尚未完全阐明[1]。 课题组前期通过高通量转录组测序技术,发现含 YEATS(Yaf9、ENL、AF9、SAS5、TAF14) 结 构 域 蛋 白 4 ( YEATS domain containing protein 4, YEATS4)可能是实验性矽肺模型进展的重要靶基因[2]。 YEATS4 是一种高度保守的,具有YEATS 家族结构域的核蛋白[3]。 作为转录激活因子,YEATS4 参与了多种肿瘤的发生发展[4-5]。 课题组多年来对N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(N-acetyl-seranyl-aspartate-lysylproline, Ac-SDKP)的抗矽肺纤维化作用机制进行了系列研究[6-7]。 因此,本研究拟观察Ac-SDKP 能否通过对YEATS4 的调节,从而抑制巨噬细胞活化,发挥拮抗矽肺纤维化的作用。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

SPF 级 3 周龄 30 只雄性 Wistar 大鼠(180±10)g 购自北京维通利华动物技术有限公司[SCXY(京)2016-0008]。 于华北理工大学医学实验中心洁净级动物房饲养[SYXK(冀)2020-0007], 室温(22±2)℃,相对湿度40%～60%,自由饮水、进食,分笼喂养。 所有操作均符合实验动物伦理学要求(LX2019035),并按照实验动物使用的3R 原则给予人道的关怀。

1.1.2 实验细胞

小鼠单核巨噬细胞RAW264.7(中国科学院上海细胞库)。

1.2 主要试剂与仪器

动式染尘控制系统(天津开发区合普工贸有限公司);兔抗I 型胶原(Collagen type I,COLI)(美国Abcom 公司);鼠抗YEATS4(美国Santa Cruz);鼠抗精氨酸酶-1(Arginase-1)(美国BD 公司);兔抗单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)(美国 Affinity 公司);α-微管蛋白(Tubulin alpha, Tublin α)(美国 Affinity 公司);二氧化……