侯 俊，廖 琼，周成敏，谭燕勤

与EBV感染相关的疾病有鼻咽癌、NK/T细胞淋巴瘤、EBV相关性胃癌、淋巴上皮瘤样癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等。原位杂交是检测组织EBV感染的金标准，与PCR和免疫组化相比，原位杂交具有高度灵敏性和特异性，组织定位明确。目前最常用的EBER原位杂交试剂分别有适用于手工和全自动免疫组化染色仪两种类型的试剂盒。本实验使用北京中杉金桥公司的手工检测试剂盒和罗氏EBER全自动检测试剂盒同时对淋巴瘤、EBV相关性胃癌、鼻咽癌几种不同类型标本进行检测，现将检测结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本选取四川省肿瘤医院2014～2020年EBV感染相关病例20例(手术切除标本8例、活检小组织8例、穿刺组织4例)。常规石蜡切片，切片厚度4 μm。每个样本连续切片3张，分别使用阳离子防脱载玻片2张(用于手工检测及HE染色)和日本松浪基膜载玻片1张(用于全自动检测)。待检切片均使用65 ℃烤片60 min。

1.2 仪器设备BenchMark ULTRA、恒温孵育箱。

1.3 试剂地高辛染色液试剂盒(北京中杉金桥公司)、二甲苯、95%乙醇、无水乙醇、TBS缓冲液、蒸馏水、中性树胶、苏木精染色液、水溶性伊红染色液，罗氏原位杂交EBER试剂盒以及配套的仪器使用试剂。

1.4 方法

1.4.1全自动染色检测 切片使用Benchmark ULTRA全自动检测：加热模块升温EZ液脱蜡，CC2细胞修复95 ℃ 4 min，Reaction Buffer清洗，加EBER探针杂交，86 ℃杂交8 min，SSC清洗；加Iview anti-fluorescein(鼠抗FITC一抗)去结合探针，孵育20 min；加Iview blue biotinylated Ig(生物素标记的山羊抗鼠Ig)孵育8 min；加Iview blue SA_AP(碱性磷酸酶标记的链霉亲和素)孵育16 min；加Iview blue enhancer(MgCl2)孵育8 min；加Iview blue NBT和Iview blue BCIP孵育32 min显色；加Red Stain II复染4 min；染色结束，蒸馏水洗；40 ℃烤箱烤干切片，用新鲜二甲苯漂洗切片(忌乙醇)；……