杨 阳，王欣晨，牛云峰，郭 炜，梁 佳，郭艳丽，董稚明

胃贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma, GCA)属于胃癌的特殊类型[1]，大部分GCA患者发现时已为进展期或晚期，易转移和复发，5年生存率低[2]。长链非编码RNA(LncRNA)是近年肿瘤领域的研究热点，大量文献报道其能够在肿瘤发生、发展的各阶段发挥促癌或抑癌作用。研究发现，LncRNA FOXD3-AS1在结直肠癌、肝癌、甲状腺癌中高表达，发挥促癌作用，但尚未见其在GCA中的报道。本文着重探讨FOXD3-AS1在GCA中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响，为GCA的诊断、预后评估和靶向治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料收集2014年6月～2016年12月河北医科大学第四医院收治的53例GCA患者的手术标本，男性47例，女性6例，中位年龄63岁(范围49～83岁)。一部分手术切除标本保存于-80 ℃液氮中便于提取RNA，另一部分标本HE染色后经病理医师诊断均为GCA。本实验经河北医科大学第四医院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 试剂反转录试剂盒、转染试剂Lipofectamine 2000和MTS试剂，均购自美国Promega公司；胰蛋白酶、TRIzol、RIPA裂解液、10×电转液、SDS-PAGE电泳液(10×)和5×蛋白上样缓冲液，均购自北京索莱宝公司。实验引物购自上海生工生物公司；实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)仪购自美国ABI公司。胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、HGC-27、MGC-803，由河北医科大学第四医院肿瘤研究所病理研究室留存并传代。实验样本均来自河北医科大学第四医院生物标本库。

1.3 方法

1.3.1qRT-PCR 收集53例GCA组织，加入TRIzol裂解液后匀浆器充分研磨；胃癌细胞用PBS冲洗，加入TRIzol充分悬浮后移入EP管，根据试剂盒说明书提取组织及4株细胞(BGC-823、SGC-7901、HGC-27、MGC-803)中的总RNA。siRNA转染SGC-7901细胞72 h后，用PBS冲洗，加入TRIzol充分悬浮后移入EP管，根据试剂盒说明书提取空白对照组、si-FOXD3-AS1转染组及si-NC转染组细胞的总RNA。……