何春梅，宁诗雨，莫之婧

肝癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一，全球肝癌的发病率和病死率呈逐年上升趋势[1]。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是原发性肝癌中最常见的肿瘤类型[2]，RNA结合蛋白PNO1是已知的核糖体组装因子，在核糖体生物合成中至关重要。近年越来越多证据表明，PNO1通过调控p53、Notch和AKT/mTOR信号通路，促进多种肿瘤的进展[3-5]。文献报道[3-4,6-7]PNO1表达上调，与结直肠癌、肺腺癌和膀胱癌的发生、发展以及迁移、侵袭密切相关。目前，PNO1在HCC中的作用报道较少。本文着重探讨PNO1 mRNA在HCC中的表达及与临床病理特征的关系，以期对其致病机制、临床意义、预后等提供参考。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集2010年12月～2012年12月桂林医学院附属医院行手术切除的66例HCC组织和21例配对的癌旁组织。66例HCC中，男性57例，女性9例。年龄>50岁者45例，年龄≤50岁者21例。肝硬化患者42例，无肝硬化患者24例。单个瘤体者46例，2个及以上瘤体者20例。多个瘤体者取直径总和，>5 cm者24例，≤5 cm者42例。低分化者20例，中+高分化者46例。肿瘤包膜完整者47例，包膜缺失者19例。采用美国癌症联合会(AJCC)第八版进行TNM分期，其中Ⅰ+Ⅱ期56例，Ⅲ+Ⅳ期10例。随访时间截至2016年4月。

1.2 主要试剂及仪器CFX96 Real-Time System QPCR仪(美国Bio-RAD)；PCR仪(美国Bio-RAD)；OMEGA RNA提取试剂盒；TAKARA逆转录试剂盒；TAKARA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)试剂盒。PNO1引物由华大基因合成，上游引物：5′-GCGCCAATGGCGAGATCTG-3′，下游引物：5′-GGTGGATCAGCAGGCACTTG-3′；β-actin为内参，上游引物：5′-GAAGAGCTACGAGCTGCCT GA-3′，下游引物：5′-CAGACAGCACTGTGTTGGCG-3′；内参GAPDH引物购自华大基因。

1.3 RNA提取和qRT-PCR检测细胞系总RNA提取使用OMEGA RNA提取试剂盒，按照RT-PCR试剂盒说明书逆转录为cDNA。PNO1基因qRT-PCR上游引物：5′-GCGCCAATGGCGAGATCTG-3′，下游引物：5′-GGTGGATCAGCAGGCACTTG-3′；β-actin为内参，上游引物：5′-GAAGAGCTACGAGCTGC CTGA-3′，下游引物：5′-CAGACAGCACTGTGTT GGCG-3′。反应条件如下：95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，60 ℃退火30 s，合计40个循环，扩增后进行溶解曲线分析，每个样品均设3个复孔。反应……