田培洁 李诗君 张 宇 刘 勇， 张松柏， 张德咏，*

（1 湖南农业大学植物保护学院，湖南长沙 410120；2 湖南大学研究生院隆平分院，湖南省农业科学院，湖南长沙 410125）

番木瓜曲叶病毒（papaya leaf curl virus，PaLCuV）、广东番茄曲叶病毒（tomato leaf curl Guangdong virus，ToLCGDV）和广西番茄曲叶病毒（tomato leaf curl Guangxi virus，ToLCGXV）均属双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus），基因组为单链环状DNA，长度为2.5～3.0 kb（Varun et al.，2017）。主要侵染双子叶植物如番茄（Solanum lycopersicum）、番木瓜（Carica papaya）、西番莲（Eclipta prostrata）、木薯（Manihot esculentaCrantz）和棉花（Gossypium）（Huang &Zhou，2006；Zhang et al.，2010），以及杂草如田麻（Corchoropsis timentosa）、胜红蓟（Ageratum conyzoidesL.）和金盏菊（Siegesbeckia orientalisL.）等（蔡建和等，2007；Venkataravanappa et al.，2019）。曲叶病毒侵染作物，造成叶片严重卷曲、畸形，植株矮化，严重影响作物产量和品质（Varun et al.，2017）。

曲叶病毒在自然条件下，仅由烟粉虱传播，且烟粉虱传毒效率高、速度快（Guo et al.，2015）。我国广西、广东、河南、云南、海南、福建和四川等省都有曲叶病毒发生危害的报道（Zhou et al.，2001；Wang et al.，2004；张鲁斌 等，2005；熊艳等，2014；谢丽雪 等，2019），呈现随传播介体烟粉虱快速扩展而快速扩散的趋势，因此，急需开展双生病毒在我国的发生、分布及其危害程度研究，明确其对我国重要经济作物的潜在威胁。

本试验于2017—2019 年，采集了我国5 个省份（甘肃、广西、海南、河北和云南）疑似感染曲叶病毒的番茄样本，采用特异性PCR 及常规测序，检测鉴定曲叶病毒种类，并对PCR 扩增序列进行系统发育和分子进化分析，研究结果可为曲叶病毒的流行分析和致病性研究提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

2017—2019 年，在甘肃、广西、海南、河北和云南等省番茄主产区共采集疑似感染曲叶病毒的病叶168 份。

1.2 叶片总DNA 抽提

叶片总DNA抽提采用CTAB 法（Zhang et al.，2010）。将叶片加入液氮研磨，加入CTAB试剂和氯仿/异戊醇（体积比24∶1）后涡旋振荡，12 000 r · min-1离心5 min 去除沉淀；……