齐献忠，邢英瀛，张小林，贾燕燕

南阳市中心医院 神经内科，河南 南阳 473000

脑卒中是导致残疾的主要原因，也是全球第2大常见的死亡原因[1]。约87%脑卒中病例为缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS），IS 的死亡率和致残率一直处于较高水平[2]。有效保护神经元损伤在IS防治中至关重要[3]。葛根素是从豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.) Ohwi 的根中提取的异黄酮苷类物质，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用[4]。葛根素被广泛用于治疗急性缺血性中风、心脏病和其他全身性疾病[5-6]。环状RNA（circRNA）通过微小RNA（miRNA）或与RNA 结合蛋白相互作用形成circRNA-miRNA-mRNA 复合物，在转录后基因表达的调节中起关键作用[7]。研究发现，circRNA 可能参与了IS 的发病过程，具有作为IS的新型诊断生物标志物和分子治疗靶点的潜力[8-9]。在IS 患者和动物模型中，circ-丝氨酸/苏氨酸蛋白扰动样激酶1（tousled-like kinase1，TLK1）表达明显上调，敲除circ-TLK1能够显著减少脑梗死体积，减少缺血性神经元损害并改善神经功能缺损[10]。因此，本研究基于circ-TLK1 探究葛根素对IS 的神经细胞保护作用及机制。

1 材料

1.1 细胞

人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH 购自美国ATCC。

1.2 药品与试剂

葛根素（质量分数≥98%，批号110752-201912）购自中国药品生物制品检定所；DMEM 高糖培养基（批号1912）购自美国Hyclone 公司；胎牛血清（批号SN201909）购自美国Gibco 公司；Lipofectamine 3000转染试剂（批号L3000-015）购自美国Invitrogen公司；MTT（批号MKBP6775V）购自美国Sigma公司；circ-TLK1过表达载体及空载 Vector、circ-TLK1小干扰RNA（si-circ-TLK1）、siRNA 阴性对照（si-NC）、miR-367-3p模拟物（miR-367-3p mimics）、miR-367-3p抑制剂（miR-367-3p inhibitors）及相应对照、Toll 样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）过表达载体质粒和空载pcDNA 均由上海吉玛制药技术有限公司合成；白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）ELISA 检测试剂盒（批号20191120）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 检测试剂盒（批号20190608）购自上海酶联生物科技有限公司；……