张 勇 高桂花

(济宁医学院药学院，日照 276826)

α-葡萄糖苷酶能催化α-1,4-糖苷键水解，使小肠内麦芽糖、蔗糖等寡糖水解。通过抑制该酶的活性，可减缓葡萄糖的生成及吸收，调整血糖水平。青钱茶是青钱柳叶、黄芪、山药及绿茶制成的泡茶饮，具有降糖作用。其降糖机制可能为竞争性抑制α-葡萄糖苷酶，故评价其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性具有十分重要的意义。

目前关于α-葡萄糖苷酶抑制剂体外评价方法主要采用紫外分光光度法[1-2]。但当抑制剂本身在测定波长下具有紫外吸收时，会对测定产生干扰，影响结果的准确度。本实验采用高效液相色谱法-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法，将干扰物质与产物分离后[3-4]，对产物进行准确测定，从而达到精准评价α-葡萄糖苷酶抑制剂活性的目的。现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Shimadzu LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津)；BP211D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ-500DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；酸度计(上海精密科学仪器有限公司)；台式高速离心机(湘仪仪器厂)。

1.2 试药

α-葡萄糖苷酶(北京百灵威科技有限公司)；4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)(北京百灵威科技有限公司，纯度98%)；对硝基酚(PNP)(北京百灵威科技有限公司，纯度99%)；米格列醇(山东西亚化学工业有限公司，纯度≥98%)；乙腈(色谱纯，Burdick & Jackson)；青钱茶(江西省修水神茶实业有限公司)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 试液的制备

1)0.1mol·L-1磷酸盐缓冲液(PBS)。精密称取0.68g磷酸二氢钾和0.705g磷酸氢二钠置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。……