张夙萍，张海星，李瑞琦，董亚娟，杨淑琴

(1甘肃省定西市药品检验检测中心，甘肃 定西；2陇西县第一人民医院，甘肃 陇西)

0 引言

当归在甘肃、四川、云南等地都有种植，甘肃岷县附近作为我国当归的道地产区已有近千年的历史，种植的当归俗称“岷归”，品质享誉国内外，近年来在青海、甘肃河西走廊等地也有大面积种植。当 归 为 伞 形 科植 物 当 归的根[1]，药性甘、辛、温，有补血活血、润肠通便、虚寒腹痛、风湿痹痛、跌扑损伤等功效，在临床使用频率高，药用最早始于《神农本草经》，素有“十方九归”之说[2]。当归多糖是从植物当归原料中提取的水溶性多糖，是当归的主要活性成分之一，具有调节免疫和补血、抗氧化的功能[3]，多糖也可用于辅助治疗免疫系统严重损伤的肿瘤以及免疫缺损的慢性疾病[4]。本实验通过对不同种植地不同采挖时期的当归头、当归身和当归尾的多糖含量进行分析，探讨不同地区采挖不同时期不同部位当归多糖含量的差异，为当归的进一步运用提供参考。

1 实验材料

1.1 试剂

无水葡萄糖对照品(批号:110833-201908，中国食品药品检定研究院)，苯酚(分析纯，上海化学试剂有限公司，批号：20190410)，无水乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20190423）、浓硫酸（分析纯，北京化工厂，批号：2019年5月30日）。

1.2 仪器

双通道紫外-可见分光光度计(UV-2700，日本岛津)；电子天平(EL204-IC/ML503-02，梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；高速粉碎机(QE-500，浙江屹立工贸有限公司)；电热恒温干燥箱(G2X-GF-MBS-2，上海浦东荣丰科学仪器有限公司)；数显电热恒温水浴锅(HH-6，常州国华电器有限公司)；数控超声波清洗器(SB5200-DTD，宁波市新芝超声仪器有限公司)；循环水式多用真空泵[SHZ-D（Ⅲ），巩义市予华仪器有限责任公司]。

1.3 药材

分别于2019年9、10、11月从甘肃岷县、民乐，青海省大通县、云南省沾益县等地采挖，置通风阴凉处晾晒至干燥。

2 方法与结果

2.1 线性关系的考察

2.1.1 对照品溶液的制备

取无水葡萄糖对照品适量，于恒温干燥箱105℃干燥至恒重，精密称定无水葡萄糖15.01mg，置25ml量瓶中加水制成每1ml中含无水葡萄糖0.6004mg的标准葡萄糖对照品溶液，保存备用。

2.1.2 标准曲线的绘制

精 密 量 取 对 照 品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分 别置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取上述各溶液2ml，置具塞试管中，分别加4%的苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入硫酸7.0ml，同时摇匀，在40℃水浴中准确保温30min，取出，置冰水浴中5min，取出，以相应的试剂溶液为空白，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，得回归方程为Y=6.631x-0.0377（R2=0.9994），在0.02402mg/ml-0.14410mg/ml浓度呈良好的线性关系。

2.2 当归多糖的含量测定

2.2.1 供试品溶液的制备

分别取当归样品粉末（过中国药典三号筛）各约0.5g，置圆底烧瓶中，加80%乙醇100ml加热回流1h，抽滤；取滤渣同滤纸加水60ml加热回流1h，趁热抽滤，取滤渣连同滤纸再次加水60ml加热回流1h，趁热抽滤后合并滤液浓缩定容至100ml量瓶中，摇匀即得。

2.2.2 精密度实验

取同批当归药材样品约0.5g,按2.2.1方法进行制备,以相应的试剂溶液作为空白,于490nm波长处测定吸光度,重复6次,分别测定其吸光度值，其吸光度平均值为0.586,RSD为0.04%,说明仪器的精密度良好。

2.2.3 重复性实验

取同一批当归药材样品约0.5g,分别精密称定,按2.2.1方法进行制备,以相应的试剂溶液作为空白,于490nm波长处测定吸光度,多糖含量平均值为11.59%,RSD为1.4%（n=6）。

2.2.4 稳定性实验

取同批当归药材样品0.5g,按2.2.1方法进行制备,以相应的试剂溶液作为空白,每20min测定1次吸光度,1h后每30min测定1次，吸光度平均值为0.554,RSD为0.04%,说明样品溶液在2h内稳定性良好。

2.2.5 当归多糖的含量测定

精密量取2ml供试品溶液置50ml的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，再精密量取溶液2ml于具塞试管中，自“加4%的苯酚溶液1ml”起，依法测定各样品的吸光度，根据回归方程计算，见表1、图1。

表1 不同产地不同采收期当归不同部位当归多糖含量测定结果

图1 不同产地不同时期不同部位当归多糖含量比较

3 讨论

本文采用了苯酚-硫酸法利用双通道紫外分光光度计测定当归不同部位中的当归多糖含量，在样品制备中发现单次回流与两次回流当归多糖含量差异较大，故采用两次回流提取[5]。结果显示，该法灵敏度高，精密度、重现性和回收率好。

由2.2.5可知，同一采收期不同产地的当归中，当归多糖含量的平均值中甘肃民乐＞甘肃岷县＞云南沾益＞青海大通，这也为当地当归生产中当归多糖的提取提供一定依据。同一产地不同部位的当归中，当归身的多糖含量高于当归头和当归尾。4个不同产地的当归中，甘肃岷县、民乐和青海当归9月底、10月中旬多糖含量差异较小且多糖含量较高，与当地当归采收期相吻合[6]，11月初的多糖含量与其他两月差异较大且多糖含量较小，所不同的是云南当归多糖含量差异较小的是10月下旬至11月上中旬，当归多糖含量也较高，而9月下旬多糖含量与其他两月差异较大多糖含量相对较低，说明不同产地不同时期采收等对当归多糖含量影响较大[7,8]。