林朴卿 阮云军

南方医科大学南方医院老年病科（广州510515）

血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）是映衬于血管壁的单层细胞，由于增龄或外界刺激诱导VEC 衰老是血管老化重要的始动因素［1］，在动脉粥样硬化［2］、肺动脉高压［3］、脑卒中［4］等血管老化相关疾病发病过程扮演着关键角色。因此，研究VEC衰老机制，寻找衰老过程的关键靶点是防治血管老化相关性疾病有效手段［5］。由于增龄导致自然衰老细胞模型具有周期长、代价大等缺陷，因而较少用于科学研究，取而代之的是诱导性细胞衰老。在饥饿、缺氧、氧化应激等众多诱导性衰老手段中，过氧化氢诱导氧化应激是最为常用的细胞衰老诱导手段［6］，具有易于获得、性质稳定、周期短等优势，同时也伴有不易控制、凋亡过多等缺点［7］。本研究将运用H2O2制造人脐静脉内皮细胞（humen umbilical vein endothelial cell，HUVEC）衰老模型，并通过检测不同时间点HUVEC 功能、衰老和凋亡的指标，探讨H2O2诱导HUVEC 衰老的最适作用时间，为细胞衰老的科学研究提供可靠的细胞模型。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和材料HUVEC 细胞株由南方医科大学中心试验室赠送；DMEM 无酚红培养基和澳洲胎牛血清购自美国Gbico 公司；细胞用过氧化氢购自上海麦克林公司；MTT 购于美国Sigma⁃Al⁃drich 公司；细胞衰老SA⁃β半糖苷酶染色试剂盒购自上海碧云天公司；细胞内皮素（ET⁃1）、NO 检测ELISA 试剂盒均购自武汉博士德生物公司；MDA、SOD、GSH⁃px 检测试剂盒购自南京建成生物公司；Bax、Bcl⁃2、p21、β⁃actin 兔抗人单克隆一抗，辣根过氧化物酶标记二抗均购自美国CST 公司。

1.2 实验分组与处理HUVEC 复苏后置于37 ℃二氧化碳含量为5%孵育箱用含10%FBS 的DMEM培养，隔日换液，待细胞融合率达80%进行传代，取3 ～5 代细胞进行实验；……