冯同富 陈德军 叶常鸿 汪黎明 金晶 雷燕 李力

1湖北省妇幼保健院妇科（武汉430070）；2广西医科大学区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室（南宁530021）

卵巢癌由于发病隐蔽、易转移，成为致死率最高的妇科恶性肿瘤［1］。癌细胞的转移是一种涉及到多种分子机制的复杂生理病理过程。研究表明，视黄醇结合蛋白2（retinol⁃binding protein 2，RBP2）参与了多种恶性肿瘤的发生和进展过程［2-3］，但其和卵巢癌的侵袭转移是否存在关联，目前国内外还鲜有报道。因此，本研究选择更易发生转移的卵巢上皮癌耐药细胞SKOV3/PTX，通过小分子干扰RNA 技术抑制RBP2 的表达，探讨RBP2 基因沉默对卵巢癌上皮细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞及质粒卵巢癌SKOV3 细胞系及其紫杉醇（paclitaxel，PTX）耐药细胞系SKOV3/PTX 细胞由广西医科大学惠赠。

1.1.2 试剂及仪器RT⁃qPCR 试剂盒购自美国In⁃vitrogen 公司；蛋白印迹法（Western blot）检测试剂套装购自上海Beyotime 公司；Matrigel 生物胶购自美国BD 公司；Transwell 小室购自美国Corning 公司；GAPDH、β⁃actin 及RBP2 抗体购自英国Abcam公司；β⁃catenin、VEGF、及MMP⁃2 抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司；实时荧光定量PCR 仪购自美国ABI 公司，离心机购自德国Eppendorf 公司，荧光倒置显微镜购自日本Olympas 公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及转染所有细胞均用含有10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 μg/mL 链霉素的DMEM 培养基，置于37 ℃、5%CO2培养箱中培养。参照干扰效果最好的针对RBP2 基因的shRNA 和阴性对照shRNA⁃NC，建立重组慢病毒干扰载体，并转染SKOV3/PTX细胞，48 h后利用荧光显微镜观察转染效率，再使用嘌呤霉素筛选，获得稳定传染细胞株。实验分为三组，干扰组：感染沉默RBP2的慢病毒的SKOV3/PTX细胞（SKOV3/PTX⁃RBP2i）；……