徐胡斌,朱 茵,刘安敏,赵起超,2,谢 恬,2,陈功星,2③

(1.杭州师范大学医学部,浙江 杭州 311121;2.浙产中药材资源开发与应用浙江省工程实验室,浙江 杭州 311121)

蛋白质组学是分子生物学的重要内容,二维凝胶电泳(2-DE)技术在蛋白质组学研究中得到了广泛的应用,它能够根据蛋白质的等电点和分子量,将蛋白质混合物中的不同蛋白分子分开,形成各自单独的蛋白质分子点,从而能够对蛋白质表达模式进行大规模分析,解读他们在不同生物下的变化,二维凝胶电泳是分离蛋白的一种强大工具,常应用于蛋白质组学研究。尽管过去了几十年,出现了更复杂和高性能的质谱分析方法,但只有结合二维凝胶电泳才使得它在蛋白研究领域发挥更大作用[1]。最近出现的热细胞转移技术(cellular thermal shift assay,CETSA)与2-DE结合成为新的技术手段,用于药物蛋白靶标分析,在大肠癌细胞中找到了药物的靶标分子丙酮酸激酶M2型(PKM2),为新药开发提供新方法[2]。二维凝胶电泳技术在等电聚焦后的第二维凝胶电泳常在大胶中进行,但目前大胶制备时容易漏胶,导致制胶困难或胶板质量不高,影响实验结果[3-4]。但目前大胶制备时容易漏胶,笔者在实验过程中摸索出一种简便的分次灌胶制胶法,有良好的制胶质量。

1 材料与方法

1.1 材料

人肺腺癌细胞株A549为本实验室保存。细胞培养试剂RPMI1640、小牛血清购于杭州曜晖生物科技有限公司;制胶大玻璃板(25.5 cm×21 cm)、制胶立架、IPG干胶条(pH 3~10)及其相应试剂、聚焦仪、电泳仪、扫描仪均为美国GE(Ettan IPGphor 3)产品;蛋白Marker、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒,购于上海碧云天生物有限公司;考马斯亮蓝染色液及其脱色液为实验室自配。……