吴 娟，曾骏文，崔冬梅

0引言

年龄相关性黄斑病变(age-related macular degeneration,ARMD)是视网膜黄斑区光感受细胞凋亡导致中央视力缺失的一种眼部疾病。ARMD的光感受器凋亡主要由于视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞失去向光感受器提供氧气和营养，并运走废物质的功能导致[1]。由于RPE特殊的解剖位置、高代谢活性以及对光感受器外段的吞噬作用，使得RPE尤其容易受到伤害[2-3]。全反式视黄酸(ATRA)是视觉循环中不可缺少的部分，作为视网膜内的一种内源性化合物，ATRA通常通过RDH(如RDH11)还原而被清除，或形成一系列困在RPE溶酶体中的视网膜衍生物[4-6]。ATRA在RPE细胞内的过度积累导致细胞毒性并导致细胞凋亡[7-8]，并在眼底变性疾病的病因中起到作用。以往的研究表明，由ATRA诱导并通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶介导的活性氧(ROS)产生参与了光感受器和RPE细胞的变性退化[9]。但关于RPE细胞变性的分子机制仍不清楚。本课题组在之前的研究中已证实ATRA过度累积导致caspase12被激活，caspase12与内质网应激反应(ERS)关系密切，本文通过对ERS进一步研究了ATRA诱导的ARPE-19凋亡的过程。证明ATRA过度累积激活了ERS中PERK-EIF2α-ATF4及IRE1α-XBP1信号途径，抑制了ATF6信号途径。我们的发现为视网膜病变中的ATRA毒性提供了新的见解。

1材料和方法

1.1材料ARPE-19细胞(美国ATCC细胞库)；DMEM/F12培养基(Gibco)；胎牛血清、全反式视黄酸(ATRA)(Sigma)；蛋白印迹检测系统(merck)；Trizol试剂(Invitrogen)；Brilliant SYBR Green试剂盒(Takara)；引物序列(上海生工科技公司)；抗BIP抗体(CST3177)、抗CHOP抗体(CST2895)、抗GAPDH抗体(CST5174)；cfx96实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测系统(Bio-Rad)；Bio-Rad Quantity One成像软件(Bio-Rad)；酶标仪(日本OLYMPUS公司)；激光共聚焦光谱显微镜(Zeiss)。

1.2方法

1.2.1细胞培养本研究不涉及人体或动物实验，ARPE-19细胞购自美国ATCC细胞库。……