阮成群，肖永杰，李记天△

骨肉瘤（osteosarcoma，OS）是儿童和青少年最常见的原发恶性骨肿瘤，其发病率逐年升高［1］。目前常采用手术切除结合化疗来控制肿瘤转移，其中局部OS患者的5年生存率约为70%，而转移或复发性患者的总体生存时间不足12个月［2］。所以，寻求新的治疗策略及治疗靶点至关重要。长链非编码RNA（long noncoding RNA，LncRNA）是一类新发现的非编码RNA分子，可作为癌基因或抑癌因子发挥作用，从而调节癌细胞的生长增殖等行为。其中Linc00891参与调控多种细胞因子-细胞因子受体相互作用的信号通路［3］。LncRNA和微小RNA（miRNA）可相互调控，影响肿瘤的发生发展［4］。miR-27a-3p在OS细胞系中的表达显著高于人正常成骨细胞［5］，且miR-27a-3p能够通过激活Wnt/β-连环素（β-catenin）通路促进结直肠癌的进展［6］。但是，Linc00891能否通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p在OS中发挥抑癌作用，目前相关研究较少。本研究通过检测Linc00891在不同OS细胞系及人成骨细胞系中的表达情况并分析过表达Linc00891对OS细胞系增殖、克隆形成、迁移、上皮间质转化的影响，同时探讨Linc00891和miR-27a-3p的结合位点以及过表达Linc00891和上调miR-27a-3p对Wnt/β-catenin信号通路的影响，以期为OS的治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料 人成骨细胞系hFOB 1.19（目录号：GNHu14）和OS细胞系U-2 OS（目录号：SCSP-5030）、Saos-2（目录号：TCHu114）、MG-63（目录号：TCHu124）、SW 1353（目录号：TCHu128）均购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。DMEM/F12培养基和10%胎牛血清（FBS）均购自美国Giboc公司；CCK-8检测试剂盒购自北京索莱宝生物科技有限公司；RNA提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；反转录试剂盒购自美国Genecopoeia公司；实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测试剂盒、Linc00891过表达阴性对照载体（pcDNA-NC）和Linc00891过表达载体（pcDNALinc00891）以及Linc00891、β-actin引物均购自生工生物工程（上海）股份有限公司；……