金晓玲，陈 岚，张 凤，黄豆豆，廖丽娜，陈万生,3 （. 海军军医大学附属长征医院药材科，上海 00003；. 空军杭州特勤疗养中心疗养三区药械科，浙江 杭州 3000；3. 上海中医药大学中药研究所，上海 003）

1960 年，Jenning 首次提出了心肌再灌注损伤的概念[1]。心肌缺血/再灌注损伤的主要原因包括氧自由基增多、细胞内钙超载及微血管损伤等[2-3]，缺血组织细胞恢复灌注后发生的再灌注损伤（MIRI）在恢复血流的过程中常会引起心肌细胞的氧化应激损伤[4-5]，往往造成患者预后不佳[6]。

升陷汤出自张锡纯《医学衷中参西录》，该方由黄芪、柴胡、升麻、桔梗、知母组成，主治大气下陷之证，临床广泛用来防治心肌缺血性疾病[7]、治疗老年慢性充血性心力衰竭[8]、治疗不稳定型心绞痛[9]、治疗青少年病毒性心肌炎[10-11]。课题组前期考察了升陷汤及各单味药对阿霉素致心肌细胞的保护作用[12]，尚未见升陷汤对心肌细胞缺氧/复氧损伤模型保护作用的报道。本实验基于经典的心肌细胞缺氧/复氧损伤模型[13]，从细胞凋亡的角度初步探讨升陷汤及单味药对心肌缺氧/复氧的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验试剂

纯净水（美国Millipore 公司）、Fura-3/AM（碧云天生物技术有限公司）、生理盐水（海军军医大学附属长征医院）；0.25%胰蛋白酶溶液（Gibco 公司）；DMEM 低糖培养基、培养液（美国Hyclone 公司）；MTT 工作液（美国sigma 公司）；二甲基亚砜（德国GmbH 公司）；PBS 缓冲液（南京滴纯生物科技有限公司）；胎牛血清（美国Gibco 公司）；DCFHDA（碧云天生物有限公司）；Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒（美国BD 公司）；16%甲醛（无甲醇，赛默飞世尔科技有限公司）；……