赵燕娜，汪丽佩，李天一，何志兴，张 婷，温成平

（1浙江中医药大学基础医学院，浙江杭州310053；2浙江中医药大学附属第一医院血液病研究所，浙江杭州310053）

异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，Allo-HSCT）近年来已成为治疗白血病和再生障碍性贫血等血液系统疾病的重要方法［1］，但是急性移植物抗宿主病（acute graftversus-host disease，aGVHD）作为主要并发症，却限制了Allo-HSCT的应用［2］。aGVHD的发病机制目前仍未完全阐明，认为它是一个多层面多步骤的病理过程。文献报道［3］，核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domainlike receptor protein 3，NLRP3）可活化白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）等细胞因子，是破坏肠道菌群及促发aGVHD的关键环节。本研究观察到aGVHD可引起小鼠外周血抗炎细胞因子IL-4和IL-10水平降低，致炎细胞因子IL-1β和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）显著增高，下调肠紧密连接蛋白之一的闭合蛋白（occludin）表达，影响肠道屏障功能，引起肠道菌群结构及靶器官病理学形态改变，并激活NLRP3炎症小体表达，从而形成恶性循环，为肠道菌群和NLRP3炎症小体参与aGVHD的发生机制提供理论依据，并可能为该疾病治疗提供靶点。

材料和方法

1 实验动物和材料

6～8周龄SPF级近交系C57BL/6雄性小鼠为供鼠，6～8周龄SPF级近交系BALB/c雌性小鼠为受鼠，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物生产许可证号为SCXK（沪）2012-0002和SCXK（沪）2013-0016。小鼠均饲养于浙江中医药大学实验动物中心，饲料、垫料和饮用水均经高压灭菌处理。PECD4和FITC-CD8抗体购自BD Pharmingen；小鼠IL-1β、IL-4、IL-10和TNF-α的ELISA试剂盒购于R&D Systems；兔抗紧密连接蛋白闭锁蛋白（occludin）抗体购于Zymed Laboratories；SP免疫组化染色试剂盒购于福州迈新生物技术公司；兔抗小鼠NLRP3、含caspase募集结……