王帅奇，孙 浩，张寿儒，陈利辉，陈秀峰，李 卫

（重庆大学附属肿瘤医院胃肠肿瘤中心，重庆400030）

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是全球发病率最高的肿瘤之一，每年有近160万例新发CRC病例［1］。CRC的存活率约为58%，并且一旦CRC进入晚期，手术切除是无用的，患者的预后极差［2］。尽管一些研究已经确定了许多与肿瘤发生有关的基因，但这些过程的分子机制尚不清楚［3-4］。因此，迫切需要进一步研究CRC发生发展的机制，寻找具有预后和治疗价值的新的治疗靶点。越来越多的研究表明，长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）在肿瘤的发展过程中起着关键作用，包括细胞增殖、细胞周期和转移［5-6］。最近的报告发现一些lncRNA在CRC的发展中起作用［7］。睾丸发育相关基因1（testicular development-related gene 1，TDRG1）是一种新发现的lncRNA，在多种肿瘤包括肺腺癌、甲状腺乳头状癌、宫颈癌和食管鳞状细胞癌中起原癌基因的作用［8-9］。然而，TDRG1在CRC中的作用尚未阐明。在本研究中，我们检测了CRC组织和正常组织中TDRG1的表达，并通过构建敲减TDRG1表达的CRC细胞模型，揭示TDRG1调节CRC细胞增殖、侵袭和迁移的机制。

材料和方法

1 临床组织标本

于2016年5月～2018年8月，在重庆大学附属肿瘤医院共收集40对CRC组织及相应的癌旁组织。标本冷冻保存在-80℃。

2 方法

2.1 细胞培养人正常结肠上皮NCM460细胞及CRC细胞系HT-29、SW480和LoVo购自ATCC。细胞培养在含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的McCoy′s 5A和高糖DMEM培养基（Gibco）中。

2.2 细胞转染由上海吉凯基因化学技术有限公司合成了抗TDRG1（sh-TDRG1）和非靶向对照（sh-NC）的慢病毒短发夹RNA（shRNA），miR-101-3p模拟物（pre-miR-101-3p）和miR-101-3p阻遏物（antimiR-101-3p）及其各自的非靶向序列（pre-NC或anti-NC）。使用Lipofectamine 3000试剂（Life Technologies）转染细胞。通过qPCR检测细胞过度表达和沉默的效率。……