刘 岩 韩风伟 闫丽娜 张琳娜 王淮兴

（承德医学院附属医院神经外科，承德067000）

胶质瘤源自脑神经上皮细胞恶性病变，是最为常见的原发性颅内肿瘤，占颅脑肿瘤的40%～50%［1-2］。3-磷酸肌醇激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（protein-ser‐ine-threonine kinase，Akt）作为经典的信号通路，在胶质瘤发生发展中起重要作用［3］。SH2B1是SH2B家族成员，是一类含有SH2和PH结构域的信号接头蛋白，在机体生长发育、免疫调节、增强神经因子诱导方面发挥调控作用［4-5］。近年来研究显示，SH2B1基因在食管癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤组织中高表达，提示其可能与癌症发生有关［6-7］。但有关SH2B1在胶质瘤中的表达尚未有研究，因此本研究以胶质瘤U87细胞为研究对象，利用siRNA干扰技术沉默SH2B1基因表达，观察U87细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的改变，旨在为SH2B1在胶质瘤发生发展中的效应机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人脑星形胶质母细胞瘤U87细胞（CCY1528）购自上海酶研生物科技有限公司。10%胎牛血清、青霉素-链霉素、胰酶、RPMI1640培养基购自美国Gibco公司；Trizol抽提试剂、逆转录试剂盒、BCA试剂盒购自BioRad公司；Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；SH2B1-siRNA、NC-siR‐NA购自南京锐真生物技术有限公司；CCK8相关试剂购自美国Sigma公司；鼠源一抗SH2B1、Ki67、PC‐NA、Bax、Bcl-2、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、GAPDH、羊抗鼠二抗购自上海圣克鲁斯生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 U87细胞培养基为含100 U/ml青霉素-链霉素、10%胎牛血清的RPMI1640培养基，于37℃、5%CO2培养箱中培养。

1.2.2 细胞转染 收集对数生长期的细胞以2.0×105个/孔接种于24孔细胞板，利用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤U87细胞，操作严格按照试剂盒说明书进行。实验分为3组：SH2B1-siRNA转染组（正义 链5′-GCCGGUCAUGUCCAAAGUATT-3′，反义链5′-UACUUUGGACAUGACCGGCTT-3′）；……