王新伟 杨道坤 梁海军 高海丽 王燕平

（新乡医学院第一附属医院感染疾病科，卫辉453100）

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染所致临床结局与机体免疫状态密切相关，急性HBV感染可诱导机体细胞免疫增强及IFN-γ和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平升高，促进病毒清除，而慢性HBV感染则诱导机体免疫耐受，导致病毒持续感染，但具体机制尚未阐明［1］。CD100是免疫信号素家族成员，在体内存在2种形式：可溶型CD100（soluble CD100，sCD100）和膜型CD100（membrane-bound CD100，mCD100），可调控机体免疫系统功能，参与多种病毒感染性疾病发病过程［2-3］。最新研究发现，CD100参与HBV感染小鼠模型体内免疫系统功能调控，但对乙型肝炎患者CD8+T细胞的调控作用及相关机制尚未阐明［4］。因此，本研究检测CD100在乙型肝炎患者中的表达，观察重组CD100对乙型肝炎患者CD8+T细胞功能的影响，为阐明HBV感染的免疫应答和炎症损伤机制提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 主要试剂 淋巴细胞分离液（北京索莱宝公司）；CD8+T细胞分选试剂盒（德国美天旎公司）；抗CD3/CD28（美国eBioscience公司）；重组人CD100（美国R&D公司）；CD100、IFN-γ和TNF-α ELISA检测试剂盒（武汉华美公司）；抗CD3-APC、抗CD8-APC Cy7、抗CD100-PE（美国BD公司）；穿孔素、颗粒酶B酶联吸附斑点试验（enzyme linked im‐munospot assay，ELISPOT）检测试剂盒（美国Abcam公司）；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）细胞毒性检测试剂盒（武汉碧云天公司）。

1.1.2 主要仪器 SORVALL高速低温离心机（美国Kendor公司）；磁力分离架（德国美天旎公司）；M680型全自动酶标仪（美国BioRad公司）；FACS‐Calibur流式细胞仪（美国BD公司）；ELISPOT读板仪（德国AID公司）。

1.1.3 研究对象 本研究方案已通过新乡医学院第一附属医院伦理委员会批准。选择2018年12月至2019年7月在我院感染疾病科就诊的急性乙型肝炎（acute hepatitis B，AHB）患者13例和慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者30例，入选条件：①年龄＞18岁且＜60岁；……