沈星星,时乐，姚亮宇，牛玉珍,梁涛

(1.南京中医药大学药学院,江苏 南京 210023；2.南京医科大学第一附属医院，江苏 南京 210029)

吴茱萸碱(EVO)是从中药吴茱萸中提取的天然生物碱，除具有较强的抗炎、镇痛作用外，还有抗肿瘤的作用[1]。有研究发现EVO在人结肠癌[2]和人胃癌细胞[3]中能诱导自噬并抑制肿瘤，而在小细胞肺癌中能诱导自噬并对肿瘤有保护作用[4]，推测EVO对不同的肿瘤自噬效果不同。氯喹(CQ)是预防和治疗疟疾的常用药，最近研究表明，CQ能通过抑制自噬和增强人体免疫力，发挥抗肿瘤作用。越来越多证据表明，抗肿瘤药物与CQ联合使用能起到协同作用，增强抑制肿瘤的能力。肝细胞癌是世界范围内最常见的血管实体瘤之一,具有血管浸润的特性，而自噬对肿瘤的发展和血管的生成作用之间的相关性是近年来研究的热点[5-7]。目前,已有研究证明EVO在人肝细胞癌HCC中可以降低VEGFA的转录活性,抑制血管生成,发挥抗肝癌的作用[8]。但EVO对肝癌细胞的自噬作用还未见报道，EVO联合CQ对肝癌细胞的活性和血管生成能力的作用也有待探讨。

1 材料

1.1 细胞与试剂

人肝癌细胞HepG2购自上海酶联生物科技有限公司。人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)来自南京中医药大学袁东平课题组。EVO标准品(HPLC≥98%)，货号:B21315,上海源叶生物科技有限公司，用DMSO溶解并稀释至1.25、2.5、5、10、20、40、80 mmol/L作为母液；CQ，美国SIGAM公司，货号：c6628-25G，用纯水溶解并稀释至25 mmol/L作为母液；VEGFA ELISA试剂盒，上海酶联生物科技有限公司;DMEM培养液和胎牛血清,美国Gibco公司；青链霉素混合液，货号：P1400，索莱宝科技有限公司；……