程方圆，路 凯，刘 捷,白 宁，徐瑞芬，霍 苗，陈 方*

0 引言

缺血性脑卒中是一种极具破坏性的脑血管疾病，有很高的致残率和死亡率[1]。现阶段，缺血性脑卒中治疗原则是恢复缺血区的血液流通，但某些情况下，恢复血流反而导致更严重的损伤[2]。研究显示，脑缺血再灌注主要损伤血脑屏障的完整性，增加细胞旁路的渗透率，导致氧化应激、炎症反应的发生，最终造成神经元凋亡、脑水肿梗死、神经功能损伤，因此，改善血脑屏障完整性是缺血性脑卒中治疗的关注重点[3-4]。

亚甲基蓝主要应用于高铁血红蛋白血症的治疗，具有抗炎、抗氧化的特点[5]。近年来研究显示，亚甲基蓝对缺血性脑卒中具有保护作用，包括经Nrf2/HO-1信号通路，降低脑中自由基ROS表达水平[6]；抑制线粒体释放细胞色素C,减少细胞凋亡，下调炎症因子表达水平[7]，最终改善神经功能，减少脑梗死体积和脑水肿[8]。然而，迄今为止，亚甲基蓝对血脑屏障的保护作用与机制鲜有报道。因此，本研究观察亚甲基蓝对脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的影响，并探讨其可能的机制。

1 实验方法

1.1 药物与仪器 亚甲基蓝(M9140)：美国SIGMA公司；occuldin、claudin-5蛋白抗体：美国Abcam公司(ab128906)；脂质过氧化物(MDA)、抗氧化酶(SOD)、IL-6、IL-1β试剂盒：南京建成公司；伊文思蓝(Evans Blue,EB)：美国SIGMA公司；颈动脉栓塞线栓：广州佳灵生物有限公司；Western blot仪器：美国Bio-Rad公司；凝胶成像仪：南京天能公司。

1.2 动物分组与给药 SPF级雄性SD大鼠60只，由西安交通大学实验动物中心提供。SD大鼠按照随机分配的原则分为5组，每组12只：假手术组，模型组，低剂量组(亚甲基蓝1 mg/kg)，中剂量组(亚甲基蓝2 mg/kg)，高剂量组(亚甲基蓝4 mg/kg)。……