包顺茹 李妍 林燕 韩塔娜

【摘 要】 目的：建立冠心七味片中对甲氧基肉桂酸乙酯的含量测定方法及挥发性成分的特征图谱。方法：采用气相色谱法建立冠心七味片的含量及特征图谱测定方法。采用DB-FFAP毛细管柱（30m×0.32mm，0.25μm），初始温度150℃，以每分钟5 ℃的速率升温至220℃，保持10min;进样温度230℃，检测器温度250℃。结果：含量测定中对甲氧基肉桂酸乙酯在29.447～588.940ng范围内呈良好的线性关系（r=0.9993），平均加样回收率为97.31%，RSD为1.01%（n=6）;建立以对甲氧基肉桂酸乙酯为参照峰的特征图谱，共11个特征峰。结论：建立的含量测定及特征图谱方法可以从定量、定性两方面对冠心七味片的挥发性成分进行控制，该方法准确可靠，可用于冠心七味片的质量控制。

【关键词】 冠心七味片;气相色谱;含量测定;特征图谱;对甲氧基肉桂酸乙酯

【中图分类号】R284 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2021）1-0020-06

Study on Quantitative Analysis and Characteristics Spectrum of Volatile Components from Guanxinqiwei Tablets

BAO Shunru LI Yan LIN Yan HAN Tana*

Inner Mongolian Institute for Drug Control，Hohhot010010，China

Abstract：Objective To establish the quantitative analysis of Ethyl 4-methoxycinnamate and the determination method of characteristics spectrum of vo1atile components from Guanxinqiwei tablets. Method The quantitative analysis and characteristics spectrum of Guanxinqiwei tablets was performed by gas chromatography. DB-FFAPcapillary column （30m×0.32mm，0.25μm）;the initial column temperature was 150℃，then 5℃·min-1up to 220℃ maintained for 10min;injection port temperatures was 230℃，detector temperatures was 250℃. Results The content of ethyl 4-methoxycinnamate was in the range of 29.447ng to 588.940ng， and the linear relationship was good， r=0.9993. Moreover， the average recovery rate was 97.31%， and RSD was 1.01%（n=6）; The specific chromatogram which comprised eleven common peaks of Guanxinqiwei tablets was established with ethyl 4-methoxycinnamate as the reference peak. Conclusion The established determination method and the GC characteristic chromatogram can be used to control the volatile components in Guanxinqiwei tablets qualitatively and quantificationally.This accurate and reliable method can be used for the quality control of Guanxinqiwei Tablets.

Keywords：Guanxinqiwei Tablets;Gas Chromatography;Content Determination; Characteristics Spectrum;Ethyl 4-methoxycinnamate

冠心七味片由丹參、檀香、降香、山柰、肉豆蔻、广枣、沙棘七味药材制备而成，具有活血化瘀、强心止痛的作用，用于冠心病、心烦心悸、心绞痛等症。现行标准为《卫生部药品标准》蒙药分册1998年版，中文名为“冠心七味片”，蒙文名为“乌兰·温都顺-7”，收载项目为【处方】【制法】【性状】【检查】项[1]。近年来仿制该品种生产企业增多，各企业注册标准均有不同程度提高，但均无对山柰的质量控制，故对其进行含量测定以期对其进行质量控制。基于处方中有檀香、降香、山柰、肉豆蔻四味药材含挥发性成分，单一的对其建立标准项目耗时耗力耗材，而中药特征图谱是一种多指标的质量控制模式 ，能够全面、综合地反映和控制中药的质量[2]。故而建立该品种挥发性成分的气相特征图谱，可以为该制剂的质量评价提供参考依据。

1 仪器与试剂试药

1.1 仪器 日本岛津GC-2010气相色谱仪、Sartorius ME5型电子天平，Mettler XP205型电子天平; AS 5150A超声清洗仪;ZHT型自动恒温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）、挥发油提取器。

1.2 试剂与试药 对甲氧基肉桂酸乙酯[北京盛世康普化工技术研究院（批号：Z06J7B17277）];降香[中国药品生物制品检定所（批号：120952-201007）];檀香[中国药品生物制品检定所（批号：121240-201002）];肉豆蔻[中国药品生物制品检定所（批号：120926-20107）];山柰[中国药品生物制品检定所（批号：121504-201203）]。乙酸乙酯为分析纯试液，无水硫酸钠为分析纯试药。

2 山柰的含量测定

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 色谱柱 聚乙二醇20000（PEG-20M）毛细管柱（柱长30m，内径0.32mm，膜厚度为0.25μm），本试验研究用DB-FFAP毛细管柱。

2.1.2 程序升温 初始温度150℃，以每分钟5 ℃的速率升温至220℃，保持10min;进样温度230℃，检测器温度250℃。

2.1.3 理论板数的确定 对供试品测定结果表明，对甲氧基肉桂酸乙酯的理论板数在60000以上均能达到与相邻峰分开，故本试验规定理论板数按对甲氧基肉桂酸乙酯峰计应不低于60000。

2.2 供试品溶液制备方法的选择

2.2.1 提取方法的选择 参照《中国药典》2015年版一部山柰鉴别项下提取方法，采用超声提取方法。

2.2.2 提取效率考察 取本品粉末5份，各约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加乙酸乙酯10mL，密塞，称定重量，分别超声处理（功率为400W，频率为40kHz）10min、20min、30min、45min、60min，取出放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，按上述色谱条件测定。结果见表1。

从表中数据可见，超声处理20min后，对甲氧基肉桂酸乙酯含量不再增加，故确定超声时间为20min。

2.3 试验溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取对甲氧基肉桂酸乙酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品粉末约1g，精密称定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯10mL，密塞，称定重量，超声处理（功率400W，频率40kHz）20min，取出，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 专属性考察 按本品处方工艺制备不含山柰的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液（缺山柰）。按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各2μL，注入气相色谱仪。结果如图1所示。

从图中可见，供试品色谱中在与对照品色谱保留时间相同的位置上有色谱峰出现，阴性对照在与对照品色谱保留时间相同的位置上也有色谱峰出现，但干扰小于5%，表明该含量测定方法阴性无干扰，专属性好。

2.5 线性考察 取对甲氧基肉桂酸乙酯对照品5.008mg，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.3μL、0.5μL、1μL、2μL、3μL、4μL、6μL注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果对甲氧基肉桂酸乙酯在29.447～588.940ng范围内呈良好的线性关系。回归方程为：Y=2499.1X-53066，r=0.9993，标准曲线数据见表2。

2.6 精密度试验 取对照品溶液，按上述色谱条件进行测定，进样量2μL，连续进样6次，记录峰面积值，其RSD为0.35%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批号供试品（批号：34151110）6份，按“2.1.3.2”下方法制备供试品溶液，分别按上述色谱条件进行测定，进样量各2μL，结果见表3。

2.8 稳定性试验 取同一批号供试品（批号：34151110），按“2.1.3.2”下方法制备供试品溶液，分别按上述色谱条件于0h、2h、4h、8h、12h、16h进行测定，结果见表4。

结果表明，RSD为0.94%，说明本试验重复性良好。

从表中数据可见，供试品溶液在16h内稳定，稳定性良好。

2.9 回收率试验 取同一批号供试品（批号：34151110，含对甲氧基肉桂酸乙酯2.02mg·g-1）6份，各约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对甲氧基肉桂酸乙酯对照品溶液10mL（浓度为0.09815mg·mL-1），密塞，称定重量，超声处理（功率400W，频率40kHz）20min，取出，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件测定，结果见表5。

加样回收试验的回收率在96.20%～98.81%之间，RSD为1.01%，说明该试验具有较好的准确性。

2.10 耐用性试验 换同等极性、不同型号的色谱柱，按确定的色谱条件，取重复性试验中的4号样品进行测定，结果见表6。

2.11 供试品含量限度确定 根据模拟样和投料时所用山柰药材中对甲氧基肉桂酸乙酯的含量，计算出模拟生产工艺转移率为54%，结合3家生产企业提供的山柰原料药材中对甲氧基肉桂酸乙酯的含量数据，详见表7，以50%的转移率计算，该品种每片含对甲氧基肉桂酸乙酯应不得少于0.60mg。

2.12 结果 按照建立的方法对8家生产企业71批次冠心七味片样品进行了含量测定，结果从0.20mg·片-1到2.53mg·片-1，其中有10批次样品含量低于拟定的限度值（0.6mg·片-1），可见对其进行含量测定存在必要性。

3 特征图谱

3.1 色谱条件的选择

3.1.1 色谱柱 聚乙二醇20000-TPA修饰（PEG-20M-TPA修饰）毛细管柱（柱长30m，内径0.32mm，膜厚度为0.25μm，HP-FFAP或DB-FFAP毛细管柱）。

3.1.2 程序升温 初始温度100℃，以每分钟2 ℃的速率升温至220℃，保持10min;进样口温度230℃，检测器温度250℃。

3.1.3 理论板数的确定 对供试品测定结果表明，对甲氧基肉桂酸乙酯的理论板数在60000以上均能达到与相邻峰分开，故本试验规定理论板数按甲氧基肉桂酸乙酯峰计应不低于60000。

3.2 提取效率考察 取本品粉末4份，各取约10g，精密称定，置1000mL圆底烧瓶中，加水500mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶中为止，再加乙酸乙酯2mL分别加热回流3h、4h、5h、6h，分取乙酸乙酯层，用铺有无水硫酸钠1g的漏斗滤过，滤液置5mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。按上述色谱条件测定，结果见表8。

從表中数据可见，加热回流5h后，对甲氧基肉桂酸乙酯含量基本不再增加，故确定加热回流5h。

3.3 试验溶液的制备

3.3.1 参照物溶液的制备 取肉豆蔻对照药材3g，降香对照药材2g，山柰对照药材1.3g，檀香对照药材1g，置同一500mL圆底烧瓶中，加水200mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶中为止，再加乙酸乙酯2mL加热回流5h，分取乙酸乙酯层，用铺有无水硫酸钠1g的漏斗滤过，滤液置5mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为对照药材参照物溶液。另精密称取对甲氧基肉桂酸乙酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品参照物溶液。

3.3.2 供试品溶液的制备 取本品粉末约10g，精密称定，置1000mL圆底烧瓶中，加水500mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶中为止，再加乙酸乙酯2mL加热回流5h，分取乙酸乙酯层，用铺有无水硫酸钠1g的漏斗滤过，滤液置5mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。

3.4 专属性试验 按供试品溶液的制备方法制备檀香、肉豆蔻、山柰、降香对照药材溶液。按确定的色谱条件，分别精密吸取参照物溶液、檀香、肉豆蔻、山柰和降香对照药材溶液各2μL，注入气相色谱仪。结果如图2所示。

从图2可见，1、2、4为降香药材特征峰;5、11为山柰药材特征峰，其中11为对甲氧基肉桂酸乙酯;3、6、7、8为肉豆蔻药材特征峰;9、10为檀香药材特征峰，表明该方法专属性好。冠心七味片中挥发性成分对照特征图谱如图3所示。

3.5 精密度试验 取同一批号供试品（批号：34151110，按“2.2.3.2”下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，进样量2μL，连续进样6次。结果，以对甲氧基肉桂酸乙酯为参照峰，各共有峰的相对保留时间的RSD≤0.026%，相对峰面积的RSD≤0.724%，表明仪器精密度良好。

3.6 重复性试验 取同一批号供试品（批号：34151110）6份，按“2.2.3.2”下方法制备供试品溶液，分别按上述色谱条件进行测定，进样量各2μL，结果，以对甲氧基肉桂酸乙酯为参照峰，各共有峰的相对保留时间的RSD≤0.049%，相对峰面积的RSD≤1.096%，表明本试验重复性良好。

3.7 稳定性试验 取同一批号供试品（批号：34151110），按“2.2.3.2”下方法制备供试品溶液，分别按上述色谱条件0h、2h、4h、8h、12h、16h进行测定，进样量各2μL。结果，以对甲氧基肉桂酸乙酯为参照峰，各共有峰的相对保留时间的RSD≤0.015%，相对峰面积的RSD≤0.929%，表明该样品在16h稳定性良好。

3.8 结果 由于原料药材的产地、采收时间、贮存条件等差异，兼顾特征图谱适用性，故仅对此次抽验的8个厂家71批次样品的色谱图中是否检出对照特征图谱中的11个特征峰进行评价。结果均检出相应的特征峰。表明该方法可作为“冠心七味片”中挥发性成分的整体质量控制的有效方法。

4 讨论

对同一厂家不同批次样品进行特征图谱测定，发现各特征峰峰面积大小存在差异，如图4所示;对8家生产企业各取1批次样品进行特征峰对比分析，结果各企业样品都具有11个特征峰，但各特征峰峰面积差异较大，尤其是檀香药材的特征峰与对照特征图谱相比差异较大，如图5所示。原因可能与原料药的质量及投料量及生产工艺有关，也不排除实验过程中提取误差。

特征图谱可以有效鉴别和评价产品的质量优劣，显示产品质量的稳定性和批间均一性[3-5]。该检测方法简便、易操作、重复性好，适合作为冠心七味片的质量标准对其质量进行控制，克服了原有质量标准无法全面体现含挥发性成分的药材内在质量的缺点。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准：蒙药分册[M].1998：141.

[2]秦红霖，李永申. 特征图谱技术在中药质量分析中的应用[J].中国实用医药，2014， 9（7）： 253-255.

[3]马敏，马 鑫. 逍遥丸中挥发性成分气相特征图谱的研究[J].光明中医，2013， 28（8）：1583-1586.

[4]吴 芳，乔蓉霞，杨瑞瑞，等. 牛黄上清丸（片、胶囊）挥发油特征图谱研究[J].中成药，2012， 34（7）：1388-1390.

[5]陈英红，罗浩铭，王颖，等. 小儿广朴止泻口服液质量标准研究[J].中国中医药科技，2018， 25（1）：57-59.

（收稿日期：2020-07-04 编辑：陶希睿）