穆杨，杨菁

(武汉大学人民医院生殖医学中心，武汉 430060)

肥胖不仅会导致糖脂代谢异常、心血管风险增加，还会对生殖系统产生较大的负面影响[1-5]。氧化损伤是肥胖患者发生不育的重要机制之一[6]。最新研究表明，氧化应激可降低男性肥胖患者的雄激素水平，进而损害其生育能力[7]。除较常见的肥胖，造成睾丸氧化应激损伤的因素还包括高龄、精索静脉曲张、不良生活习惯、放化疗等。

二甲双胍是胰岛素增敏剂，临床上常用于治疗Ⅱ型糖尿病，也用于单纯性肥胖的辅助治疗。近期有研究表明，二甲双胍可以抑制靶细胞的氧化应激过度激活，对靶细胞具有保护作用[8-9]。但二甲双胍对氧化应激导致的睾丸间质细胞损伤有怎样的作用及相关作用机制，目前仍未见报道。本研究通过过氧化氢(H2O2)诱导TM3小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤，构建体外细胞模型，观察二甲双胍对TM3小鼠睾丸间质细胞的保护性作用。

材料与方法

一、实验材料

1.细胞来源：TM3小鼠睾丸间质细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。

2.主要试剂：DMEM培养基和胎牛血清均购自美国Gibco公司，二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公司，CCK8检测试剂盒购自日本同仁生物公司；超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)检测试剂盒均购自南京建成生物技术有限公司；抗Cleaved-caspase3兔单克隆抗体(9579)和抗GAPDH兔单克隆抗体(5174)购自美国Cell Signaling Technology公司；二甲双胍(HY-B0627)购自美国MedChemExpress公司，其纯度>97.0%。其余实验试剂的纯度均为分析纯。

二、研究方法

1.TM3细胞培养与分组处理：TM3细胞种在6孔板上后，用含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素的DMEM培养基在37℃、5%CO2的条件下培养48 h。细……