曾凯，王欣冉，杜雪

(哈尔滨医科大学附属第一医院重症医学科，黑龙江 哈尔滨 150000)

巨噬细胞是重要的天然免疫细胞，可以发生不同水平的活化状态，形成不同的极化类型，即 M1 型极化(介导促炎和杀伤)和 M2 型极化(介导抑炎和修复)，且巨噬细胞极化是其发挥免疫稳态调控功能的重要形式[1-2]。由于巨噬细胞在微环境稳态调控中发挥重要的作用，若巨噬细胞的极化失衡，可导致微环境内免疫稳态平衡被破坏，引发多种免疫相关性疾病[3-4]。因此，寻找巨噬细胞极化的调控靶点，深入探讨其调控机制，对于靶向巨噬细胞的免疫干预意义重大。Hippo通路是细胞增殖、存活、分化和维持组织稳态的有效调节通路[5-6]，而YAP既是Hippo信号通路中的关键蛋白，也是一种重要的免疫调控分子[7]。目前，尚无有关YAP对巨噬细胞极化的作用和机制详细报道，本研究旨在探讨Hippo信号通路关键蛋白YAP调控巨噬细胞极化的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人单核细胞系THP-1细胞购于ATCC，RPMI 1640培养基购自上海源培生物科技股份有限公司；胎牛血清购自天津康源生物技术有限公司；佛波酯(PMA)、脂多糖(LPS)、白细胞介素-4(IL-4)购自美国Sigma公司；FITC-CD86、PE-CD206抗体购自美国BD公司；YAP表达质粒、包含无序基因片段的对照质粒及YAP、IL-1β、CCL22、β-actin的引物由大连宝生物有限公司合成；Lipofectamine 2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司；TRIzol试剂、逆转录试剂盒、PCR Master Mix试剂盒购自大连大连宝生物有限公司；TNF-α和TGF-β酶联免疫吸附试剂盒购自美国eBiosicence公司；兔抗人YAP抗体、兔抗人IL-1β抗体、兔抗人CCL22抗体、兔抗人GAPDH抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。……