杜若桑 张晓辉 柳依江 郑淑美 崔 海

（首都医科大学，北京 100069）

颅脑损伤（TBI）是指外力导致的脑部结构或功能上的损伤。在工业化社会中它是青年人的主要死因之一［1］。TBI发生后常因细胞凋亡、炎症反应、血脑屏障破坏、氧化应激、兴奋性毒性等病理改变导致继发性损伤［2-4］。针灸对TBI的疗效已被诸多临床和动物研究证实［5-7］。本研究拟观察针刺对TBI大鼠脑皮质内凋亡相关蛋白Cleaved Caspases-3蛋白表达、脑组织病理形态表现和运动、感觉等神经功能的影响来探讨针刺对TBI的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级6～7周龄雄性SD大鼠40只，体质量200～240 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2016-0006。于首都医科大学动物实验中心分笼饲养，温度（25±2）℃，于光照、黑暗周期各12 h的恒温恒湿环境，自由摄食和饮水。

1.2 仪器与试剂

精密颅脑损伤撞击器PCI3000（美国Hatteras instruments公司），68025型脑立体定位仪（深圳瑞沃德生命技术有限公司），华佗牌一次性无菌针灸针（0.30 mm×13 mm，苏州医疗用品厂有限公司），7750型Rotarod大鼠转棒仪（意大利UgoBasile公司），酶标仪（美国Thermo），VE186转移电泳槽（上海天能科技有限公司），Cleaved Caspase-3抗体（美国CST公司，9661T），ECL发光液（美国Millipore公司，WBKLS0500），BCA蛋白定量试剂盒（北京康为世纪生物科技有限公司，02912E），蛋白酶抑制剂（瑞士罗氏公司，04693116001），Goat Anti-Rabbit IgG（H+L）（美国Jackson公司，111-035-003），Goat Anti-Mouse IgG（H+L）（美国Jackson公司，115-035-003）。

1.3 分组及造模

1）动物分组：适应性饲养7 d后根据随机数字表法将大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组，每组各10只。模型组和针刺组制备TBI模型。假手术组仅开骨窗不进行打击，空白组不进行任何处理。2）模型制备：将10%水合氯醛溶液腹腔注射以麻醉大鼠（0.4 mL/100 g），大鼠俯卧位固定于脑立体定位仪，在大鼠眼睛后方沿正中线做长约1.5 cm的纵形切口，暴露出前囟。……