青黛通过影响GPR41/43信号通路调控溃疡性结肠炎大鼠Treg/Th17免疫平衡的机制研究*
2021-05-12孙中美李军祥路琼琼丁庞华赵兴杰毛堂友
孙中美 李军祥 路琼琼 丁庞华 史 瑞 赵兴杰 谭 祥 姜 慧 毛堂友
(北京中医药大学东方医院,北京 100078)
溃疡性结肠炎是一种发生于结、直肠黏膜的反复发作的非特异炎症性疾病,主要表现为腹泻、黏液脓血便、腹痛、里急后重等,严重影响患者的生活质量[1]。前期研究发现,青黛可通过调节肠道菌群及短链脂肪酸丁酸水平,从而明显改善DSS诱导的结肠炎,但是下游具体调控机制尚未阐明[2]。最新研究表明,G蛋白偶联受体(GPRs)可作为丁酸的特异性受体,介导肠上皮细胞的屏障功能,维持机体的免疫稳态[3]。本实验在前期研究的基础上,从GPRs信号入手,重点研究其下游Th17/Treg细胞相关因子的表达,以进一步探究青黛治疗溃疡性结肠炎的具体作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康的SPF级雄性SD大鼠(180~220 g)购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,许可证号SCXK-2016-0002,饲养于北京中医药大学东方医院实验动物中心,温度20~24℃;相对湿度50%~60%,12 h光照/黑暗循环,所有大鼠自由进食饮水。
1.2 药物 青黛配方颗粒购自北京康仁堂药业有限公司,药物的制备及质量检测均由北京康仁堂药业有限公司完成。每日灌胃前,将青黛充分溶解于烧开的去离子水中,获得青黛溶液;根据前期研究,本实验青黛剂量折合生药量为 600 mg/kg[2]。
1.3 试剂与仪器 葡聚糖硫酸钠(MW36-50KDa;MP Biomedical,Burlingame,CA,USA),便潜血试纸(珠海贝索生物技术有限公司,广东珠海),GPR41抗体(OmnimAbs,OM184469),GPR43抗体(OmnimAbs,OM173356),FOXP3抗体(OmnimAbs,OM279147),RORγ抗体(OmnimAbs,OM188985);反转录试剂盒:HiFiScript快速去基因组cDNA第一链合成试剂盒(康为世纪,CW2582);qPCR试剂盒:KAPA SYBR FAST qPCR Kit Master Mix(2×)(KAPA Biosystems,KK4601)。
1.4 分组及干预 本实验是前期研究的延伸,大鼠分组、造模以及各组干预方法均如前报道[2]。……
