孙蕾，蓝秀，吕祝庆，李伟文

温州医科大学附属第五医院 呼吸内科，浙江 丽水 323000

肺癌是世界范围内发病率和病死率最高的恶性肿瘤，严重威胁人类健康，其中，非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常见的恶性肿瘤，占肺癌的85%以上，大部分患者确诊时已为晚期，治疗效果不佳，5年生存率仅为17.1%[1]。吉非替尼（gefitinib，Gef）的应用显著延长了患者无进展期和生存期，但极易耐药[2]。五味子乙素（Schisandrin B，Sch B）是一种具有广谱抗癌作用的中药单体[3]，不仅能够诱导肿瘤细胞凋亡、抑制细胞增殖[4]，还能抵抗多种抗肿瘤药物（如多西他赛、阿霉素）的耐药性[5-7]。然而，Sch B能够缓解吉非替尼耐药的作用及其机制仍未明确。胰岛素样生长因子结合蛋白2（insulin-like growth factor binding protein 2，IGFBP2）在肺癌组织中呈高表达，与肿瘤细胞的增殖、迁移、转化等恶性生物行为密切相关[8]。也有研究报道IGFBP2与埃罗替尼、达沙替尼等药耐药有关[9]，IGFBP2 可能是缓解吉非替尼耐药的关键靶点。因此，本研究观察Sch B对Gef耐药的PC9（PC9/GR）细胞增殖、凋亡的影响，并探讨IGFBP2在Sch B抑制PC9/GR细胞增殖中的作用。

1 材料和方法

1.1 试剂 Sch B（＞98%，相对分子质量：400.4648， 货号：S117968）购自美国阿拉丁公司，杜尔伯科改良伊格尔培养基（DMEM，货号：11965118）、青霉素-链霉素双抗（货号：15140148）、胎牛血清（FBS，货号：10091155）、胰蛋白酶（货号：25300054）购自美国Gibco公司，3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT，货号：M5655）、二甲亚砜（货号：D2650）购自美国Sigma公司；IGFBP2（货号：3922）、p-AKT（货号：4060）、AKT（货号：4685）、p-mTORC1（货号：5536）、mTORC1（货号：2587）和β-actin（货号：4970）单克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。

1.2 细胞培养与驯化 将人肺癌PC9细胞（ATCC细胞库）培养种植于含10% FBS、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的DMEM，取对数生长期细胞进行实验。采用浓度递增法构建Gef耐药的细胞，使PC9能在含有200 nmol/L的Gef培养基中稳定存活，建立PC9获得性耐药细胞（PC9/GR）。……