宋锦静 韦彤彤 梁凯 黄志广 陈罡 茅乃权 阳洁

肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一，每年新诊断180万例，死亡160万例［1］，肺腺癌是肺癌最常见的组织病理学亚型，约占肺癌的40%，且患病率和死亡率逐年上升［2］。因此，探讨肺腺癌发生发展机制有重要意义。缝隙连接蛋白（connexin，Cx）是一个多基因编码的跨膜蛋白家族。研究表明肿瘤发生发展过程中，常伴随Cx表达异常和（或）Cx形成的半通道、缝隙连接功能异常［3］，在胃癌、乳腺癌等癌组织及转移部位均表达且与预后相关［4］。Cx26是Cx家族β亚型成员，结构包括4个可跨膜结构域、2个胞外环结构域、2个细胞质N端、2个细胞质环和2个高度可变的细胞质C端结构域［3］，既往研究发现其在肺腺癌、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤增殖、迁移、侵袭以及化疗敏感性方面发挥重要的调控作用［5⁃9］。肿瘤微环境中最主要的细胞成分肿瘤相关成纤维细胞（cancer⁃associated fibroblasts，CAFs）可通过细胞间通讯、释放细胞因子或趋化因子、调节信号通路和抗肿瘤免疫反应等调控肿瘤细胞的生物学特性［10⁃12］。但肺腺癌微环境中CAFs是否表达Cx26及Cx26是否参与肺腺癌的发生发展尚不清楚。本研究通过分离手术切除肺腺癌组织及正常肺组织中的CAFs和正常肺成纤维细胞（nor⁃mal lung fibroblasts，NLFs）进行原代培养，并采用qRT⁃PCR和组织免疫荧光染色法分别检测CAFs及肺腺癌组织中Cx26的表达及分布情况，探讨CAFs中Cx26的表达变化及其与肺腺癌发生发展的关系。

1 材料与方法

1.1 细胞株及主要试剂

人肺腺癌细胞株A549购自中科院上海研究所细胞库，用含10%胎牛血清和1%青霉素⁃链霉素的RPMI⁃1640培养基置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。……