王江波

(濮阳市人民医院心胸外科，河南 濮阳 457009)

肺癌仍然是全世界癌症相关死亡的主要原因[1]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占肺癌的80%，其中大多数为肺腺癌(lung adenocarcinoma，LUAD)。尽管可以通过使用其他技术和新开发的治疗方法来提高LUAD的早期诊断[2]，但大多数患者的预后仍然很差。恶性肿瘤最常见的特征是转移，这是导致患者5年生存率低的主要原因[3]。因此，阐明LUAD的分子机制，探索治疗肺腺癌的新靶标具有重要意义。

微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA，包括19～25个核苷酸。先前的研究结果表明[4]，成熟的miRNA可通过与3＇非翻译区(3＇-UTR)结合而抑制靶mRNA的翻译。miRNA在调节广泛的细胞过程中发挥关键作用，包括增殖、分化、凋亡和转移[5]。最近的研究已经发现，miRNA的异常表达与许多疾病密切相关，特别是癌症[6]。此外，在有关人类癌症的多项研究中，已经揭示了miR-144-3p作为肿瘤抑制因子的作用，例如，Liu等报道miR-144-3p通过靶向下调EZH2抑制LUAD细胞的增殖和侵袭[7]。miR-144还可以通过靶向ZFX抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移[8]。但是，关于miR-144-3p与钙黏着蛋白2(CDH2)在LUAD的作用机制还不清楚。

在本次研究中，我们系统阐述了LUAD中miR-144-3p和CDH2的作用机制，为LUAD的分子靶向治疗提供了新的思路。

1 材料与方法

1.1 生物信息学分析

从TCGA数据库(https://portal.gdc.cancer.gov/)下载TCGA-LUAD的miRNA表达量数据和临床数据[n(Normal)=46，n(tumor)=521]，利用edge R进行差异分析(|logFC|>2，padj<0.01)。利用Target Scan数据库预测miR-144-3p的潜在靶向基因。同时，对TCGA中LUAD的基因表达情况进行差异分析(采用R语言“DESeq2”包，以正常样本为对照，进行差异分析，以|logFC|>1.5，adj p-value<0.05为差异mRNA筛选标准)，并选择分析结果中在LUAD中的差异上调基因与预测结果取交集。

1.2 细胞培养

人肺腺癌细胞Calu-3、HCC-827、NCI-H23以及人支气管上皮细胞HBE均购自美国ATCC公司。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基在37℃、5% CO2环境中孵育培养。

1.3 细胞转染

取对数生长期的HCC-827细胞2×105个悬于2mL完全培养液中，接种于6孔板内，细胞长至70%汇合时进行细胞转染。按……