彭松林 王尚 王振民 龙灿玲 唐菀泽 贺小琴 陈高扬

骨形态计量学是骨科研究中常用的研究骨代谢的手段，但骨组织结构致密且富含钙盐和无机盐导致其脆性增加，普通切片很难切除完整骨组织[1]。目前常用的骨组织切片需进行脱钙处理，而普通脱钙液普遍需要3～4 周，甚至几个月的脱钙时间，耗时长且对组织形态有着不可逆转的损伤[2-3]。由于骨组织的特殊性，导致计算其动态学参数时需要借助硬组织切片机，并且为了保证切出完整的条带，借助塑料包埋技术在骨组织中的切片的方法应运而生[4-5]。目前常规的骨组织切片需要Leica SP1600 锯式切片机和SP2600 切片机并配合钨钢刀片使用，同时还得借助特殊的膜用来黏附骨组织[6]，导致实验成本巨大，限制了大部分科研团队的研究进展[7]。本研究通过普通冰冻切片机和透明胶带黏附骨组织的方法，观察其荧光条带变化和骨组织形态完整性，旨在探索简化的不脱钙硬组织切片技术。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

4%中性多聚甲醛固定液[生工生物工程（上海）股份有限公司]；钙黄绿素（Sigma 公司，美国）；819 一次性刀片（莱卡，德国）；Cryofilmtype3C 黏附膜（SECTION-LAB，日本）碳酸氢钠[生工生物工程（上海）股份有限公司]；文具透明胶带（铠圳，深圳）；OCT 冷冻切片包埋剂（樱花，美国）；医用生理盐水；蔗糖（麦克林，上海）。其中，钙黄绿素需要用含2%的碳酸氢钠生理盐水配制成5‰浓度溶解后避光保存现配现用，按照每只动物25 mg/kg 腹腔注射。

Leica CM1860 冰冻切片机（莱卡，德国），Leica Dmi8倒置荧光显微镜（莱卡，德国），ZH-GSZ 高速颅骨钻（安徽正华生物仪器设备有限公司），SkyScan 1076 micro-CT 扫描仪（布鲁克，比利时）。……