周 雯，唐 敏，王咸寿，冯秋芳，郑 琳，王青松

（海南医学院1.组织胚胎学教研室，2.生物技术专业实验室，3.生物化学与分子生物学教研室，海南海口571199）

我国传统中药黄芩是唇形科植物黄芩的干燥根，黄芩素是黄芩中含量最高的一种黄酮类化合物，也是黄芩的主要活性成分。研究表明，黄芩素具有清除氧自由基［1］、抗炎［2，3］、抗病毒［4］、抗肿瘤［4］及护肝［5］等广泛作用。同时，黄芩素能够抑制包括糖尿病在内的多种慢性炎症性疾病的发生和发展［1-6］。大血管病变是糖尿病的主要并发症之一，而血管平滑肌细胞从收缩型到合成型的表型转化是糖尿病大血管病发生发展的重要环节。因此，研究黄芩素在血管平滑肌细胞表型转化中的作用对于包括糖尿病在内的慢性炎症性疾病的防治具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

大鼠血管平滑肌细胞株（A10 细胞）购自ATCC细胞库。

1.2 主要试剂

黄芩素购自成都曼思特生物科技有限公司；葡萄糖、DMEM 培养基、胎牛血清购自Sigma 公司；Trizol 购自Ambion 公司；RNA 提取试剂盒、逆转录试剂盒购自TaKaRa 公司；荧光定量PCR 试剂盒购自TIANGEN 公司；PCR 引物由上海生工合成；BCA 蛋白定量试剂盒购自TaKaRa 公司；兔多抗α-SMA、鼠单抗SM22-α、鼠单抗Osteopontin（OPN）、兔多抗α-tubulin 购自武汉三鹰生物技术有限公司。

1.3 细胞培养

将大鼠血管平滑肌细胞株（A10 细胞）放置于含10% 胎牛血清的DMEM 培养基中，培养条件为5% CO2的37 ℃培养箱。细胞实验分为4 组：正常对照组（Control）：5 mmol/L D-glucose 加25 mmol/L 甘露醇；黄芩素处理组（BAI）：50 μg/mL 黄芩素加5 mmol/L D-glucose 加25 mmol/L 甘露醇；高糖处理组（HG）：25 mmol/L D-glucose；高糖加黄芩素组（HG+BAI）：50 μg/mL 黄芩素加25 mmol/L D-glucose 共4 组。

1.4 荧光定量PCR 分析α-SMA、SM22-α 和OPN mRNA 水平的改变

将黄芩素和葡萄糖处理后的细胞，加入Trizol试剂处理后，RNA 提取试剂盒提取总RNA，逆转录试剂盒获得cDNA。……