徐芳媛，许金森，潘晓华*，黄倩茹，万 隆，罗 来，朱佳敏

（1.福建中医药大学针灸学院，福建 福州350122；2.福建省中医药科学院，福建 福州350003；3.福建省经络感传重点实验室，福建 福州350003）

脑卒中为我国目前最常见的疾病之一，其临床表现多以神经感觉障碍、平衡能力减弱和记忆力减退为主［1-3］。目前对于脑卒中的治疗无特效药物，电针被广泛应用于脑卒中的治疗，神庭、百会穴为临床的经验效穴，既往已有大量文献证实其有效性［4-6］。但是电针治疗改善脑卒中认知功能的作用机制尚未明了，因此，本研究将通过电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞模型（MCAO）大鼠3个行为学指标的影响，探讨电针改善脑卒中患者认知功能的疗效，为其临床进一步推广提供一定的参考依据。

1 实验材料与方法

1.1 实验动物与分组 选用成年的SD清洁级雄性大鼠共18只，体质量为（300±20）g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，饲养于福建医科大学实验动物中心［许可证号：SCXK（沪）2017-0005；合格证编号：201500558815］。饲养条件：温度（22±2）℃，湿度（55±15）%，12 h明暗交替，自由进食饮水。18只大鼠按照随机数字表法分为电针组、模型组和假手术组，每组6只，造模前先适应性饲养1周。实验过程中均严格按照国际动物保护及使用指南的规定进行。

1.2 主要实验器械与试剂 华佗牌30号0.5寸不锈钢毫针、SDZ-Ⅱ型华佗牌电子针疗仪（苏州医疗用品厂有限公司）；小动物呼吸麻醉系统（深圳瑞沃德生命科技公司，型号：R407）；L3800号大鼠用MCAO线栓（广州佳灵生物技术有限公司）；洁净工作台（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。

1.3 造模 参考Longa改良线栓法［7］制备大鼠MCAO模型，在电针组和模型组的大鼠颈部左侧进行手术，操作方法：大鼠术前禁食不禁水12 h，5%异氟烷将大鼠麻醉，在造模过程中需观察大鼠对手术刺激的反应以调节异氟烷浓度、流量来维持麻醉的深度，使大鼠不至于在手术过程中清醒或者死亡；将大鼠固定、消毒后于颈部前正中线切开皮肤，钝性分离左侧颈总动脉（CCA）、颈内动脉（ICA）、颈外动脉（ECA）；结扎ECA，使用动脉夹夹闭ICA、ECA的远心端；在ECA距CCA的分叉1 cm处剪开一个小口，将大鼠用MCAO线栓缓慢沿ECA插入ICA，控制进线的深度为18～22 mm，然后缝合大鼠颈部伤口并消毒；2 h后用剪刀把露出体外的线栓减去，实现再灌注损伤。等待大鼠完全苏醒后，对所有的大鼠进行提尾实验观察［8］：将大鼠的尾巴提起，如果发现其右前肢呈现屈曲的状态，那么就表明造模成功。假手术组只将大鼠颈部皮肤剪开，钝性分离CCA、ICA、ECA后即缝合，不予结扎和插线。

1.4 干预措施 电针组于造模后24 h进行电针干预，参照《实验针灸学》［9］选取大鼠神庭、百会穴，使用华佗牌30号0.5寸不锈钢毫针沿头部向上斜刺0.2～0.3 cm，连接SDZ-Ⅱ华佗牌电子针疗仪，打开电源，选取疏密波，频率为2～10 Hz，调整至大鼠耳朵轻微抖动，且大鼠不撕叫、不挣扎为度。每次干预时间为20 min，每天1次，连续7 d。模型组和假手术组不予干预。

1.5 检测指标

1.5.1 神经行为学评分 在干预第1天、第7天根据Longa法［10］对3组大鼠进行神经行为学评分，判断其神经功能缺损的情况。0分：无神经功能缺失症状；1分：不能完全伸展患侧前爪；2分：行走时向患侧转圈；3分：行走时向患侧倾倒；4分：不能自主行走，意识丧失。

1.5.2 平衡木实验评分 在干预第1天、第3天、第7天对3组大鼠进行平衡木实验评分，判断其平衡能力的表现。将大鼠放置在1根宽1.5cm、长30 cm、高于地面30 cm的木条上，对其进行观察。实验前1周对各组大鼠进行训练，每天8点和17点各训练1次，每次10 min，以大鼠能顺利在平横木上保持稳定为标准。评分为0～6分，0分：大鼠在平衡木上能够爬行并且保持平衡稳定且时间≥60 s；1分：大鼠在平衡木上需要抓紧平衡木边缘才能保持平衡稳定且时间≥60 s；2分：大鼠需抓紧平衡木但是同时有一只脚落下才能保持平衡稳定且时间≥60 s；3分：大鼠需要抓紧平衡木但是同时有两只脚落下，能够坚持在平衡木上的时间≥60 s；4分：大鼠试图在平衡木上保持平衡，但落下，同时能够坚持在平衡木上的时间≥40 s；5分：大鼠试图在平衡木上保持平衡，但落下，同时能够坚持在平衡木上的时间≥20 s；6分：落下，没有试图保持平衡或抓住平衡木，能够坚持在平衡木上的时间≤20 s［11］。

1.5.3 Morris水迷宫实验 分为定位航行实验和空间探索实验。在干预第3～6天每天对3组大鼠进行定位航行实验，记录其逃避潜伏期；第7天对3组大鼠进行空间探索实验，记录其穿越平台的次数。把圆形水迷宫装置等分为4份，按顺时针方向标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个象限，同时将平台放置于第Ⅲ象限，实验前2 d将3组大鼠放置在水迷宫中进行适应性训练，使其能够在水中正常找到平台。定位航行实验操作步骤［12］：将3组大鼠根据顺时针的方向从水池中设置好的4个象限面向池壁放入水中，如果大鼠在90 s内能够找到平台并且爬上平台同时停留了3 s以上，即认为大鼠找到了平台，大鼠进入水中到爬上平台时间称为逃避潜伏期；如果大鼠在90 s内不能够找到平台，一直在水中游动，需引导大鼠爬上平台，并且停留10 s，逃避潜伏期就计为90 s。空间探索实验操作步骤［12］：撤除水中的平台，在上述设置好的4个象限将3组大鼠放入水中，使其自由游泳90 s，分别记录各组大鼠90 s内穿越原平台象限的次数。

1.6 统计学方法 采用SPSS 27.0软件进行数据分析。计量资料符合正态分布的以（±s）表示，2组间比较采用独立样本T检验，多组间比较采用One-WayAnova方法进行检验；方差齐时，采用Least Significant Difference方法；方差不齐时，采用Dunnett T3方法；不符合正态性分布的采用非参数检验。

2 结 果

2.1 3组大鼠神经功能缺损评分比较 见表1。

表1 3组大鼠神经功能缺损评分比较（±s） 分

表1 3组大鼠神经功能缺损评分比较（±s） 分

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05。

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2.2 3组大鼠平衡木实验评分比较 见表2。

表2 3组大鼠平衡木实验评分比较（±s） 分

表2 3组大鼠平衡木实验评分比较（±s） 分

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05。

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2.3 3组大鼠逃避潜伏期和穿越平台次数比较 见表3、表4。

表3 3组大鼠逃避潜伏期比较（±s）s

表3 3组大鼠逃避潜伏期比较（±s）s

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05。

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表4 3组大鼠穿越平台次数比较（±s） 次

表4 3组大鼠穿越平台次数比较（±s） 次

注：与假手术组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05。

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3 讨 论

本研究结果显示：电针第7天电针组神经功能缺损评分高于模型组，但低于假手术组，说明电针干预可以改善MACO大鼠神经功能缺损程度；电针第3天电针组平衡木实验评分高于模型组，但低于假手术组，电针第7天电针组平衡木实验评分高于模型组，但低于假手术组，同时低于第3天电针组的评分，说明电针干预可以改善MACO大鼠平衡能力的程度，并且随着治疗时间的增加，改善程度越明显；电针第3天电针组与模型组逃避潜伏期无差异，且均短于假手术组，电针第4～5天电针组短于模型组，长于假手术组，电针第6天电针组明显短于模型组，且与假手术组无差异，说明电针干预可以促进MACO大鼠方向定位能力的恢复，同时随着干预时间的增加，改善效果越明显；电针第7天电针组穿越平台次数多于模型组，少于假手术组，说明电针干预可以改善MACO大鼠学习记忆能力。

神庭穴为督脉之要穴，与百会穴相配可醒脑开窍，调和一身之阴阳。督脉入络脑，与脑相关，刺激督脉可参与脑的一系列调节。同时两个穴位都位于头部，也属于近端取穴，可以明显地改善和调节认知功能［13］。电针通过连续的微电流对两个局部穴位进行刺激［14］，能够改善手针治疗无法做到的连续而持久的行针，显著提高疗效。同时微电流的刺激也能够影响大脑的皮部，激发人体自身调节的功能，从而进一步增加大脑血液循环和供应，有助于疾病的好转，同时促进患者认知功能的改善，提高其生活质量。本实验为电针改善神经功能缺损、平衡能力和记忆认知能力提供了一定的理论依据，但是电针组认知功能虽均有明显好转，仍然无法恢复至正常状态，可能与电针疗程，刺激强度、次数、频率等因素有关。后续实验可以根据这些相关因素进行设计探索，以明确影响电针治疗脑卒中疗效的具体因素。