刘晓岚 刘晓庆 荆雪宁 唐妮 景政 孔晋亮 宋志军 吴红

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是临床常见的细菌生物被膜（Biofilms，BF）相关感染致病菌。BF是细菌粘附于活性或惰性物体表面形成的高密度细菌团块，并由自身产生的粘性胞外基质包裹着的具有三维立体结构的生物群体[1，2]。生物被膜中的细菌对抗生素和宿主免疫攻击的抵抗能力大大提高，所以BF 的形成给治疗带来很大的困难[3]。而群体感应（Quorum sensing，QS）系统在BF 感染过程中发挥着非常重要的调节和协调作用。QS是指当细菌数量达到一定的密度时才能发生的感应现象，它是一种密度依赖的细菌-细胞间信号机制，由相应的信号分子与受体蛋白结合，在细菌毒力和BF 形成的调控中起着重要作用[4～8]。本实验采用QS系统完整的PAO1野生型菌株及其同源QS系统的PAO1 lasR/rhlR基因缺陷型菌株体外培养BF 感染的载体移植到小鼠腹腔，然后观察群体感应系统的lasR/rhlR基因缺陷对小鼠腹腔铜绿假单胞菌生物被膜感染致病性的影响。

1 材料与方法

1.1 实验菌株铜绿假单胞菌PAO1野生型，PAO1 lasR/rhlR基因缺陷型（丹麦哥本哈根大学医院临床微生物科惠赠）。

1.2 实验动物8～9 周龄清洁级健康雌性KM 小鼠，体重18～22g，广西医科大学动物实验中心提供，动物合格证号SCXK 桂2014-0002。

1.3 载体将一次性使用引流管（苏州鑫达医疗器材有限公司）切割成直径为5mm 的小圆片，高压灭菌后使用。PA 在37℃恒温摇床中培养20h，将细菌浓度调整至所需的OD600=0.05，用24 孔板每孔分别加入2.0ml 调好的菌液或生理盐水，浸泡无菌的一次性引流管圆片，37℃恒温培养20h，取出载体，生理盐水冲洗两遍备用。……