崔自强 窦剑 高庆军 赵鑫 高峰 姜翀弋 曹经琳 王巍

1河北医科大学第三医院肝胆外科，石家庄 050051；2河北医科大学第三医院病理科，石家庄 050051；3复旦大学附属华东医院普外科，上海 200040；4复旦大学附属肿瘤医院胰腺外科，上海 200032

胰腺癌恶性程度高，预后极差，且发病率和死亡率均呈上升趋势。人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)为表皮生长因子受体家族的二号成员，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白[1]。HER2是细胞生长、分化及存活的重要调节基因。有研究证明，HER2在乳腺癌等多种实体肿瘤中过表达，导致恶性肿瘤发生，且预示患者预后差[2]。但HER2在胰腺癌中的表达及其与患者预后的关系尚不明确。本研究检测PDAC患者肿瘤组织HER2的表达，探讨HER2的表达与胰腺癌发展及预后的关系。

材料与方法

一、胰腺组织标本

收集2001年1月至2012年12月间上海复旦大学附属华东医院病理科存档的PDAC组织石蜡标本109例，其中男性67例，女性42例，年龄35～82(61.7±10.1)岁，中位年龄63岁。纳入标准：(1)行胰腺癌根治性手术；(2)病理诊断为PDAC；(3)患者术前未行放化疗；(4)肿瘤无远处转移；(5)癌肿未侵犯腹腔干或肠系膜上动脉；(6)无围手术期死亡。另收集上海复旦大学附属华东医院病理科存档的正常胰腺组织石蜡标本27例作为对照组。

患者出院后通过门诊复查及电话随访了解其病情发展，94例获得预后结局，随访截止日为2020年12月。患者的生存期定义为入组时间至死亡时间或随访终止时间。

二、胰腺癌组织HER2蛋白表达检测

所有标本常规切片，厚度为4 μm，采用免疫组织化学Envision二步染色法检测胰腺组织HER2蛋白表达，步骤严格按试剂盒说明书进行。兔抗人HER2抗体、GT1009系列抗体稀释液和GTVisionⅢ抗鼠/兔通用型检测试剂盒均购自DAKO公司。由两名病理科医师独立阅片，参考Hercep Test评分判定标准[3]，根据细胞膜染色程度和阳性细胞占比进行评定。细胞膜染色阳性细胞占比<10%为阴性(-)；细胞膜呈淡黄色，占比≥10%为弱阳性(+)；细胞膜呈黄色，占比≥10%为阳性(++)；细胞膜呈棕黄色，占比≥10%为强阳性(+++)。阳性和强阳性定义为过表达。

三、统计学处理

结 果

一、PDAC组织与正常胰腺组织HER2蛋白表达

109例PDAC组织中32例(29.4%)HER2蛋白表达为-，39例(35.8%)+，28例(25.7%)++，10例(9.2%)+++，过表达率为34.9%(图1)。27例正常胰腺组织中，HER2蛋白表达为-或+，无过表达者。PDAC组织HER2过表达率显著高于正常胰腺组织，差异有统计学意义(χ2=13.063，P=0.000)。

注：PDAC为胰腺导管腺癌；HER2为人表皮生长因子受体2图1 PDAC组织HER2蛋白阴性(1A)、弱阳性(1B)、阳性(1C)、强阳性(1D)表达(免疫组织化学 ×100)

二、HER2蛋白表达与PDAC临床病理特征的相关性

HER2蛋白过表达与患者年龄显著相关，≥65岁的PDAC患者显著多于<65岁患者，而与患者性别、肿瘤部位、分化程度、T分期、N分期、神经侵犯和切缘阳性均无关(P值均>0.05，表1)。

三、HER2表达与PDAC患者术后生存期的相关性

单因素Cox比例风险分析显示，手术切除标本切缘阳性及HER2表达与PDAC患者术后生存期相关，而与患者性别、年龄及肿瘤部位、分化程度、T分期、N分期、神经侵犯等均无关(表2)；多因素Cox比例风险分析显示，手术切除标本切缘阳性、HER2表达是影响PDAC患者生存期的预后因素(表3)。Kaplan-Meier法生存分析显示，HER2表达+++患者的术后中位生存期为128.43个月，HER2表达-、+、++的患者术后中位生存期为21.53个月，HER2表达+++组患者的生存期明显长于HER2表达-～++组，差异有统计学意义(P=0.038，图2)。

表1 HER2蛋白表达水平与胰腺导管腺癌患者临床病理特征的关系[例(%)]

表2 94例胰腺导管腺癌患者术后生存期的单因素分析

表3 94例胰腺导管腺癌患者术后生存期的多因素分析

注：PDAC为胰腺导管腺癌；HER2为人表皮生长因子受体2图2 PDAC患者HER2不同表达水平的术后生存曲线

讨 论

HER2基因最早由Shih等[4]提出，定位于人17号染色体长臂上，分子质量约为185 000，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白[1]。在特定条件下，过度表达的HER2可形成二聚体并发生自身磷酸化，进而激活Ras蛋白，通过TPK-Ras-MAPK途径，导致基因转录或关闭，最终调节细胞生长、增殖和分化[2]。因此，HER2在很多实体肿瘤的发生和发展过程中扮演着重要的角色。曲妥珠单抗通过抑制乳腺癌中HER2二聚体的形成，从而发挥抑制肿瘤生长的作用[5]。HER2的规范化检测为乳腺癌的治疗带来了革命性的改变。鉴于胰腺癌的高度恶性和有限的临床干预，且有关胰腺导管腺癌HER2表达及其与预后关系的国内外临床研究较少，本研究检测HER2蛋白在接受根治性切除术的PDAC患者标本中表达情况，并分析HER2表达与患者预后的关系。

本研究发现，109例PDAC的HER2蛋白过表达率为34.9%，而在27例正常胰腺组织中过表达率为0。PDAC组织中HER2过表达率显著高于正常胰腺组织，提示HER2表达在PDAC的发展过程中可能起重要作用，HER2可作为胰腺正常组织和PDAC组织鉴别的标志物。

本研究结果显示，HER2表达与年龄相关，其中≥65岁的PDAC患者HER2过表达率显著高于<65岁患者(P=0.043)，此一发现为首次报道。Komoto等[6]对129例无远处转移、无腹腔播散的PDAC根治性切除肿瘤标本进行研究，认为HER2表达与T分期相关，但本研究的T分期与HER2表达未见明显相关性。

国内外关于胰腺癌HER2表达与患者预后关系的研究较少，且两者的关系存有争议。Lei等[3]研究显示，HER2蛋白过表达者占47.6%，HER2蛋白过表达胰腺癌患者生存期仅为(7.3±3.8)个月，而HER2蛋白不表达和正常表达患者生存期长达(19.1±11.7)个月，两组差异有统计学意义，胰腺癌患者HER2蛋白过表达提示预后差。Koka等[7]对308例胰腺癌患者研究发现，仅48例HER2过表达，约占16%，HER2过表达者生存期为11个月，不过表达者生存期为7个月，结果与上述研究相反。Ata等[8]检测30例胰腺癌组织HER2表达，并分析其与预后的关系，认为HER2过表达对胰腺癌患者预后无预测价值。本研究单因素生存分析显示，HER2表达+ ++者术后中位生存时间为128.43个月，HER2表达为-、+、+ +患者术后中位生存时间为21.53个月，PDAC组织HER2表达+ ++患者术后生存时间明显长于HER2表达-～+ +患者(P=0.038)。多因素COX比例风险分析也显示HER2表达+ ++的PDAC患者术后生存时间较HER2表达-～+ +患者显著延长，HER2表达是影响PDAC预后的独立因素，提示HER2可考虑作为评价PDAC生物学行为及评估预后的指标。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突