谢晓佩,王 琦,孔新平,吴庆侠*,董海龙,李家奎，曾江勇

(1.西藏农牧学院 动物科学学院，西藏 林芝 860000；2.西藏自治区农科院 畜牧兽医研究所，西藏 拉萨 850000)

近年来，益生菌(Probiotics)制剂受到了众多关注并获得了广泛的研制及应用，以避免使用抗生素带来的DNA污染、细菌耐药性、甚至超级细菌等危害。2001年世界卫生组织(WHO)和世界粮农组织(FAO)将益生菌定义为摄入一定数量后对宿主健康有益的活菌[1]。益生菌具有改善动物胃肠道平衡、促进动物生长、提高饲料利用率、增进动物健康、改善畜产品品质和养殖环境等作用[2]。由于饲料加工贮藏运输过程中需要对菌体进行灭活处理，所以提高益生菌制品的稳定性很重要。芽孢菌因特殊的结构决定了其特殊的物理性质，抗逆性强，存活率高，易生长，是无毒、无残留、无污染的绿色添加剂。枯草芽孢杆菌作为饲料添加剂的两种芽孢杆菌之一，具有广阔的发展前景和巨大的生态效益和社会效益[3]。牦牛生长环境特殊，牦牛用益生菌最好分离自健康牦牛[4]。本试验采集西藏林芝健康牦牛的新鲜粪便，分离并筛选出具备较好耐受性的牦牛源枯草芽孢杆菌，为牦牛专用益生菌制剂的研发提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验设备与试剂

Milli-O○RAdvantage A10○R超纯水系统-超纯水机，高压灭菌锅，恒温恒湿培养箱(购自上海博讯实业有限公司)，生化培养箱，恒温水浴锅，磁力搅拌器(购自金坛市盛蓝仪器制造有限公司)，超净工作台(购自江苏苏静集团)，离心机(购自美国Thermo公司)，摇床(购自河南兄弟仪器设备有限公司)，显微镜(购自日本OLYMPUS公司)，梯度PCR仪(购自日本TAKARA公司)，电泳仪，凝胶成像系统(购自杭州朗基科学仪器有限公司)等。……