朱丹丹， 何 银， 陈 龙

中国科学院合肥肿瘤医院 1.放射影像科； 2.病理科，安徽 合肥 230031； 3.安徽省淮北市人民医院医学影像科

胃癌是消化系统恶性肿瘤之一，约占全世界癌症病例的7%，占全世界癌症死亡的9%[1]。尽管手术、放疗、化疗对胃癌有明显改善作用，但中晚期患者的预后仍很差，尤其是有淋巴结转移(lymph node metastasis，LNM)的患者[2]。然而，目前尚无有效的检测LNM的方法。虽然CT是检测胃癌中LNM的常规影像学方法，但在转移淋巴结<5 mm的情况下，CT的灵敏度仅为6.1%[3]。此外，反应性或有益性淋巴结肿大、放射科医师的能力和临床经验也可能导致LNM检测的差异较大，差异范围为38.5%～86.26%[4-5]。因此，需要寻找一些客观的标志物来鉴别胃癌中的LNM。microRNAs(miRNA)是一组长度为19～25个核苷酸的非编码RNA基因产物，与多种肿瘤的发生、发展有关[6]。新的证据表明，miRNA的表达改变通过调节靶向基因参与多种肿瘤生物学过程，如细胞生长、增殖、血管生成、迁移、侵袭等[7]。更重要的是，在人体体液中可以稳定地检测到源自原发性肿瘤组织的循环miRNA[8]。这些特征使循环miRNA成为用于肿瘤检测和预后的理想非侵入性指标。最近研究发现，胃癌患者血清外泌体中miRNA-21表达上调，并且其高表达与多种不良的临床病理因素及患者的不良预后有关[8]。此外，Yoon等[9]发现，胃癌切除后残余组织中miR-146b-5p表达增加被确定为肿瘤复发和不良生存率的重要危险因素。然而，miR-146b-5p是否参与胃癌中LNM的发生知之甚少。在本研究中，我们探讨miR-146b-5p的表达水平与LNM、肿瘤分期的关系，并分析了临床血清标本中miR-146b-5p检测联合CT扫描对胃癌中LNM的鉴别诊断价值。此外，还评估了miR-146b-5p在胃癌细胞中的生物学功能。

1 资料与方法

1.1 一般资料研究对象为中国科学院合肥肿瘤医院2018年1月至2019年12月确诊为胃癌的100例患者，男65例，女35例，年龄(62.4±5.8)岁。纳入标准：(1)患者接受胃大部切除或全胃切除术+淋巴结清扫术；(2)患者在手术切除前10 d左右进行标准对比增强CT检查。排除标准：接受术前治疗(化疗、放疗、其他治疗)或同时患有其他肿瘤疾病的患者。初诊时每例患者静脉穿刺取全血5 ml。采血后1 h内用1 500×g离心法分离血清，4 ℃离心10 min，彻底清除细胞碎片。然后将上清液(血清)转移到无RNase/DNase的试管中，并在-80 ℃下保存，直到进一步处理。选取100名年龄和性别匹配的健康志愿者的血样作为对照，男58例，女42例，年龄(60.9±4.4)岁。收集患者的CT影像和临床病理特征。本研究得到了中国科学院合肥肿瘤医院临床研究伦理委员会的批准(批号：ZKHZY2018-Q004)。每例患者在参与研究前均获得书面知情同意。

1.2 RNA提取与定量实时PCR(qRT-PCR)使用TRIzol试剂(美国Invitrogen公司)从胃癌细胞、血清中提取总RNA。使用PrimeScript RT试剂盒(日本Takara公司)将每个RNA转录成互补DNA。采用SYBR Premix Ex TaqTM(日本Takara公司)在ViiA 7快速实时PCR系统(Applied Biosystems，NY，USA)上进行qRT-PCR分析。反应条件如下：95 ℃持续7 min，然后43个95 ℃持续10 s和60 ℃持续30 s的循环。……